Шипица лечить чем: ШИПИГА (ШИПИЦА) — ЛЕЧЕНИЕ И ПРОФИЛАКТИКА новости

Содержание

шипица на руке вывести

шипица на руке вывести

шипица на руке вывести

>>>ПЕРЕЙТИ НА ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ >>>

Что такое шипица на руке вывести?

Использовала Папидерм, чтобы справиться с бородавками, которые постоянно появлялись на коже. Иногда получалось от одной избавиться, так тут же еще три в другом месте вылезало, ужас просто. Ни одно средство так толком и не помогло, а вот Папидерм стал настоящим спасением. Избавилась от всех бородавок примерно за три недели, теперь рада поделиться своей историей, надеюсь, что она кому-то будет полезна.

Эффект от применения шипица на руке вывести

Папилломы появляются вследствие попадания в организм с ослабленным иммунитетом вируса папилломы. Затем это приводит к появлению на коже родинок, бородавок и т.д. Несмотря на внешнее проявление вируса, он поражает организм изнутри. Новообразования могут появляться также в носу, ротовой полости, внутренних органах, а также половых органах. Для того, чтобы избавиться от этой проблемы, существует отличное средство - Papiderm от папиллом и бородавок.

Мнение специалиста

Две недели назад с помощью средства Папидерм избавилась от всех папиллом на теле. Убирает всё это очень быстро и не портит здоровую кожу как это делает чистотел, я поэтому и искала альтернативное вещество, это лучшим вариантом оказалось. Удобно наносить, при том экономное очень, достаточно капли и папилломы нет. Стоит препарат дёшево, это тоже большой плюс.

Как заказать

Для того чтобы оформить заказ шипица на руке вывести необходимо оставить свои контактные данные на сайте. В течение 15 минут оператор свяжется с вами. Уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 3-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении.

Отзывы покупателей:

Катя

Используя Papiderm, вы навсегда избавитесь от новообразований, вирус в вашем организме будет подавлен, а иммунная система – восстановлена. Преимуществом перед некоторыми препаратами является то, что организм не привыкает. Даже после того, как прекратите его употреблять, вирус не будет проявляться снова, поскольку ваша иммунная система может уже самостоятельно справиться с проблемой.

Kira

Использовала препарат Папидерм для избавления от бородавки, она у меня одна была, но огромная. Купила средство, и через пару недель забыла, что вообще была такая проблема. Поэтому сейчас только положительный отзыв могу написать, ничего плохого в средстве нет, одни плюсы. Соглашусь с комментарием выше, в препарате только натуральные компоненты присутствуют, поэтому он несет исключительно пользу.

Уже второй раз заказываю продукцию компании Native Pharm, и второй раз мне помогает их средство. В первый раз я заказывал средство для похудения, можете найти в моих отзывах. Вместе с заказом мне пришёл каталог на остальную продукцию. И я заказал для себя Papiderm от папиллом. Заказывал сразу курсом. Думал, что нужно только мазать, но можно ещё и внутрь принимать. Так даже удобнее, потому что мазать забывал. Выраденного вкуса и запаха нет. Баночка всего 10 мл, на долго не хватит, поэтому надо сразу курс брать. В общем, папилломы стали подсыхать отвалилась пока только одна. Буду дальше продолжать пользоваться. Где купить шипица на руке вывести? Две недели назад с помощью средства Папидерм избавилась от всех папиллом на теле. Убирает всё это очень быстро и не портит здоровую кожу как это делает чистотел, я поэтому и искала альтернативное вещество, это лучшим вариантом оказалось. Удобно наносить, при том экономное очень, достаточно капли и папилломы нет. Стоит препарат дёшево, это тоже большой плюс.

Как удалить шипицу на пальце руки? Удаление шипицы должно проводиться в условиях медицинского учреждения. . Как вывести шипицу на пальце в домашних условиях? Удалить шипицу в домашних условиях можно попробовать при помощи рецептов народной медицины. Предварительно пациенты должны. Шипица – весьма неприятное образование на пальцах рук, причиняющее боль и создающее неудобство.  . Именно поэтому у многих людей возникает вопрос: шипица на пальце руки как вывести? На него мы и попытаемся ответить. Бородавка или шипица – это внешнее проявление вируса папилломы человека (определенные типы ВПЧ). Образование является косметическим дефектом, может приносить ряд неудобств. Как вывести шипицу пластырем Салипод? Как заговорить шипицу на ноге, руке ниткой: заговор. . Как вывести шипицу прополисом? Шипица – это вирусное кожное заболевание, которое сопровождается неприятными ощущениями, и болью при нажатии. Шипица на пальце руки - причины возникновения, диагностика, лечение в домашних условиях и удаление. Бородавку, которая по виду похожа на неоднородный узелок или сосок, вызывает дискомфорт и резкую боль при надавливании, называют шипицей. Это доброкачественное новообразование, которое. Шипица на пальце руки – это очень неприятное доброкачественное образование – бородавка, спровоцированная вирусом папилломы человека. Выглядит она как узелок прозрачного или белого цвета. Причины появления шипицы на руке.
Шипица – обиходное название обыкновенной бородавки, имеющей вирусное происхождение. . К самым разнообразным методам прибегают люди в попытках вывести шипицу с пальца руки: от лечения соками растений и химическими веществами до заговоров и других сомнительных. Шипица – это разновидность бородавки, уплотнение в виде узелочка белого, прозрачного цвета. Новообразование вызвано вирусом папилломы, при отсутствии терапии может увеличиваться в размерах. Шипица – это распространенное дерматологическое заболевание, разновидность бородавки, обычно возникающее на ступнях ног или ладонях у человека. Это кожное новообразование может долгое время не причинять существенного вреда человеку, кроме эстетической непривлекательности, но со временем способно. Кожа человека больше остальных органов подвержена воздействию внешней среды и атакам разного рода вирусов, бактерий. Вовсе не странно, что со временем на коже, люди отмечают некие уплотнения.
https://marineairsupply.com/userfiles/klareol_sredstvo_ot_papilomo_virusnoi_infektsii9727. xml
http://willa-larysa.pl/userfiles/Papiderm_v_Voskresenske5268.xml

https://www.telewebmarketing.com/FCKeditor/maz_klareol_gde_kupit2282.xml
http://celcg.pl/uploaded/Papiderm_v_Kurgane9080.xml
Папилломы появляются вследствие попадания в организм с ослабленным иммунитетом вируса папилломы. Затем это приводит к появлению на коже родинок, бородавок и т.д. Несмотря на внешнее проявление вируса, он поражает организм изнутри. Новообразования могут появляться также в носу, ротовой полости, внутренних органах, а также половых органах. Для того, чтобы избавиться от этой проблемы, существует отличное средство - Papiderm от папиллом и бородавок.
шипица на руке вывести
Использовала Папидерм, чтобы справиться с бородавками, которые постоянно появлялись на коже. Иногда получалось от одной избавиться, так тут же еще три в другом месте вылезало, ужас просто. Ни одно средство так толком и не помогло, а вот Папидерм стал настоящим спасением. Избавилась от всех бородавок примерно за три недели, теперь рада поделиться своей историей, надеюсь, что она кому-то будет полезна.
Бородавки нуждаются в лечении, ведь они становятся угрозой заражения для других людей, имеют способность перерождаться в . Бородавки в паху – это результат заражения вирусом папилломы человека (ВПЧ), передающегося при непосредственном контакте с больным. В данном случае передача. Бородавки в области паха активизируются под воздействием следующих факторов . Способы лечения. Как лечить наросты в паховой области, зависит от многих факторов. Но кондиломы в паховой области, как правило, возникают в месте внедрения вируса. . Бородавки в паху – не просто безобидный нарост. Мало того, что они могут вызывать болезненные ощущения во время интимной близости. Занимаюсь лечением папиллом и бородавок у людей уже много лет. . Папилломы и бородавки, расположенные в паху, при определенных условиях могут перерасти в злокачественные . Как и какими методами можно убрать наросты в области паха? В первую очередь лечение подразумевает укрепление ослабленной.
Бородавки в области паха у мужчин появляются вследствие проникновения вируса . Среди паховых бородавок выделяют частое появление остроконечных . Если возникли бородавки в паху у мужчин, лечение должно быть направлено на их удаление и оказание противовирусного действия. Сделать это можно. Бородавки, которые возникают в области промежности, представляют собой не . Для удаления бородавок в паху лучше использовать лазер. . При самостоятельном их применении можно вызвать химический ожог кожи в паховой области. Криодеструкция. Замораживание бородавки жидким азотом. Папилломы в паховой области как у сильной, так и у слабой половины человечества, являются . Медикаментозная терапия при лечении бородавок в паху у мужчин. Бородавки – заболевание, которое вызвано вирусом папилломы. Как правило, бородавки появляются на руках, ногах, лице и. Бородавки в области паха бывают таких видов . Бородавки в паху у женщин появляются на шейке матки, на поверхности половых губ, во влагалище. В области ануса наросты могут появляться как у мужчин, так и у женщин.
Бородавки в паху у мужчин и женщин вызваны вирусом папилломы человека. Рассмотрим способы лечения, такие как . Причины появления. Вполне вероятно, что причиной появлений бородавок в области паха на интимных местах могут стать незащищенные половые акты. Выделяют такие основные. Бородавки в паху – распространенный недуг среди мужчин всего мира. Внешне такие новообразования имеют совершенно другой вид, отличаясь от тех, которые могут появиться на руках, стопах, голове. Бородавки в паху представляют собой отростки телесного цвета с острыми концами, которые располагаются.

шипица препараты для лечения фото

шипица препараты для лечения фото

шипица препараты для лечения фото

>>>ПЕРЕЙТИ НА ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ >>>

Что такое шипица препараты для лечения фото?

Свойства препарата Папидерм: повышает иммунитет; способствует подавлению активности вируса в организме; уменьшает имеющиеся бородавки; предотвращает появление новых наростов. Препарат действует деликатно, поэтому не оказывает мгновенного эффекта. Конечный результат можно оценить только после полного курса лечения.

Эффект от применения шипица препараты для лечения фото

Всю жизнь страдаю от папиллом на ступнях ног. И к хирургическому вмешательству прибегала и к выжиганию азотом, все равно они появляются через 2-3 месяца. Попадались разные врачи и разные средства, а комплексов по поводу ступней становилось все больше. Нашла то, что помогает НАДОЛГО, наконец. Папидерм достаточно быстро их убирает, к тому же уже практически год я их не встречаю на своем теле вообще! Возможно, у каждого своя реакция на препарат, но для меня это спасение.

Мнение специалиста

Пять причин сделать выбор в пользу раствора Папидерм: исключительно натуральный состав; комплексное влияние на организм; 96% довольных покупателей; деликатное воздействие, без риска побочных эффектов; доказанный результат.

Как заказать

Для того чтобы оформить заказ шипица препараты для лечения фото необходимо оставить свои контактные данные на сайте. В течение 15 минут оператор свяжется с вами. Уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 3-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении.

Отзывы покупателей:

Тая

Папидерм – это уникальное лекарство, не имеющее аналогов. Своим иммуностимулирующим действием препарат обязан, в первую очередь, кордицепсу. Это растение быстро повышает иммунитет, стимулируя все силы организма для борьбы с вирусом, вызывающим изменение клеток кожи. Желтокорень обладает противовоспалительным действием и повышает иммунитет. Противовирусное действие этого экстракта обеспечивает безболезненное разрушение клеток бородавки при регулярном использовании. Побеги картофеля стимулируют выработку интерферона. В результате повышается иммунитет, как общий, так и местный. Подавление активности вируса ВПЧ приводит к постепенному уменьшению бородавок. Черный орех является лучшим профилактическим средством при злокачественных бородавках. Применение препаратов на его основе защищает от развития рака шейки матки, вызванного вирусом папилломы человека.

Кроме того, черный орех укрепляет иммунитет и помогает быстрее победить вирус. Маклюра, или адамово яблоко, издавна используется для удаления бородавок. Эти плоды ценятся своим противовирусным и иммуностимулирующим действием, благодаря чему подавляют активность ВПЧ и устраняют последствия его деятельности (бородавки и папилломы). Шиитаке является мощным антиоксидантом, который способствует выведению токсинов, повышает иммунитет и защищает от рака. Средство применяется в терапии различных доброкачественных новообразований с потенциальной угрозой перерождения клеток в злокачественные.

Ия

Бородавки и папилломы – серьезные косметические недостатки, избавиться от которых бывает сложно. Для эффективного удаления папиллом обычно предлагается либо лазерное выжигание, которое серьезно бьет по карману, либо прижигающие средства на основе кислот и щелочей, что чревато образованием шрамов и грубых рубцов. Мало кто знает, что победить бородавки с помощью натуральных средств вполне реально, и пример тому – препарат Папидерм.

С момента появления в продаже Папидерма, число операций по удалению папиллом, бородавок и других типов накожных наростов, уменьшилось. Наконец учёные изобрели препарат, позволяющий медикаментозно справиться с такой проблемой. При этом активные компоненты средства помогают уничтожить вирус – основного виновника заболевания. Во всём мире около 80% людей являются носителями ВПЧ. Некоторые могут прожить с ним всю жизнь, даже не догадываясь о том, что заражены. Другим везёт меньше – многочисленные наросты на теле доставляют серьёзный дискомфорт. Где купить шипица препараты для лечения фото? Пять причин сделать выбор в пользу раствора Папидерм: исключительно натуральный состав; комплексное влияние на организм; 96% довольных покупателей; деликатное воздействие, без риска побочных эффектов; доказанный результат.
Очень эффективными лекарствами от шипиц считаются прижигающие аптечные препараты. . Для лечения шипиц рекомендуется принимать таблетки. Попадая внутрь, препарат начинает стимулировать выработку организмом интерферонов. Это белки, основной функцией которых является борьба с вирусами. Шипица – это разновидность бородавки. Каковы ее причины и лечение, а также как удалить шипицу, в т. ч. в домашних условиях, – вопросы, интересующие многих и мужчин, и женщин. Шипица – это бородавка, образование которой вызывает вирус папилломы человека. . Она доставляет много неприятностей и неудобств, поэтому лечение лучше всего начинать как можно раньше. Обзор популярных средств от шипиц и их эффективность. . Шипица — это доброкачественные кожные образования малого размера на стопах и ладонях. . Препараты для лечения образований представлены в нескольких формах. Лечением шипиц занимается врач дерматолог, который может не только назначать медикаментозное лечение, но и проводить удаление нароста. . Среди самых популярных аптечных препаратов для удаления шипицы можно выделить: Солкодерм. Этот препарат продается в виде раствора и обеспечивает. Обзор эффективны лекарственных препаратов для лечения шипиц и правила их использования.  . Правила применения лекарств от шипицы. Шипица — твердый, четко очерченный нарост на подошве. В этой статье мы расскажем про образование шипицы на ноге. Рассмотрим основные симптомы и эффективные методы лечения. Вы ознакомитесь с причинами ее появления. Как лечить шипицу на ноге при помощи медикаментозных средств в домашних условиях. . Шипица — причины появление и методы лечения. . Сегодня легко найти множество препаратов, которые позволяют удалить шипицу в короткий срок. Для этой цели можно применять различные лекарственные формы. Описание средств и препаратов для избавления от шипицы самостоятельно. . Как избавиться от шипицы? В этом помогут аптечные препараты. . Высокой эффективностью обладают средства от шипицы, которые включают в свой состав человеческий интерферон. Мазь Виферон является. Лечение медикаментозными средствами. Кератолиз. Данный способ терапии применяется на начальных этапах развития бородавки. . Мазь от шипицы. Эти препараты непосредственно действуют на пораженное место, уничтожая вирусы. Также мази предотвращают распространение инфекции на. Посмотрите, как происходит лазерное лечение шипицы на ноге, фото наглядно демонстрирует процесс. . Консервативный метод подразумевает лечение шипицы на ноге в домашних условиях, при помощи медикаментозных препаратов. Оглавление. 1 Будьте осторожны. 2 Отчего появляются шипицы на ногах. 3 Как вывести шипицу на ноге. 4 Мнение врачей о самых эффективных методах лечения бородавок и папиллом. 5 Аптечные средства от шипицы на ногах. Лечение шипицы на ноге химическими препаратами. Консервативный метод лечения предусматривает прижигание подошвенной бородавки химическими реагентами, которые наносят на образование, а затем удаляют омертвевшие участки. Недостатком такого лечения являются довольно сильные. Приведенные препараты — лишь часть лекарственных средств, разрешенных для лечения ладонно-подошвенных бородавок у . Такие вмешательства могут привести к рецидиву (вновь растет шипица нередко с формированием новых бородавок), поскольку образование глубоко прорастает в кожу. Тогда как такими.
http://tartak-monis.pl/tartak/images/lechenie_shipitsy_na_stupne_nogi8453.xml
http://www.shetravels.eu/userfiles/shipitsa_u_detei_prichiny_i_lechenie9337.xml

http://www.womenssupportproject.co.uk/userfiles/lekarstvo_protiv_virusa_papillomy7507.xml
http://maggievanostrand.com/uploads/mediakakoe_sredstvo_ot_borodavok_effektivnoe1877.xml
Всю жизнь страдаю от папиллом на ступнях ног. И к хирургическому вмешательству прибегала и к выжиганию азотом, все равно они появляются через 2-3 месяца. Попадались разные врачи и разные средства, а комплексов по поводу ступней становилось все больше. Нашла то, что помогает НАДОЛГО, наконец. Папидерм достаточно быстро их убирает, к тому же уже практически год я их не встречаю на своем теле вообще! Возможно, у каждого своя реакция на препарат, но для меня это спасение.
шипица препараты для лечения фото
Свойства препарата Папидерм: повышает иммунитет; способствует подавлению активности вируса в организме; уменьшает имеющиеся бородавки; предотвращает появление новых наростов. Препарат действует деликатно, поэтому не оказывает мгновенного эффекта. Конечный результат можно оценить только после полного курса лечения.
Форум о кондиломах / Суперчистотел от кондилом, отзывы. 09.02.2014, Вася Всего сообщений: 71. Мне интересно каким образом удалются кандиломы суперчистотелом. Нужно ли дополнительные кремы антисептики и т.п. Сам процесс интересен. Напишите свои отзывы об этом средстве. Ответить. Итак, средство СуперЧистотел представляет собой прозрачную жидкость в . Суперчистотел - копеечное средство для удаления бородавок и папиллом в . Фото до и после! Много фото в процессе лечения, мои советы и обзор других способов лечения бородавки. Читать все отзывы 18. Популярные категории. Суперчистотел против кондилом — Лечение папиллом. . На фото раствор Суперчистотела от папиллом, 3 мл. Препарат Суперчистотело, применяемый для выведения доброкачественных новообразований, вызванных ВПЧ, не имеет ничего общего с лекарственным растением чистотелом. Применение суперчистотела при кондиломах активно используется в домашних условиях. Бывает часто так, что для борьбы с новообразованиями на коже возникает желание использовать уже проверенные способы. Препарат Суперчистотел и его аналоги. . 2 Мнение врачей о самых эффективных методах лечения бородавок и папиллом. . Наличие папиллом, бородавок, кондилом, родинок и шипиц на теле — первый признак злокаственной меланомы! Спешим Вас предостеречь, большинство лекарств лечащих бородавки. Лечение кожных новообразований Суперчистотелом. Лечение и удаление бородавок, папиллом, мозолей и кератом . А вот от остроконечных кондилом избавиться с помощью этого препарата самостоятельно не получится, поскольку. Суперчистотел является водным препаратом, который предназначается для выведения мозолей, бородавок и папиллом. При его применении дефекты кожи практически полностью исчезают. Если прочитать отзывы врачей, то уже несколько. Какие препараты необходимы при лечении кондилом. . Суперчистотел – наиболее популярное и доступное средство для местного прижигания. . Фото: новообразования с признаками воспаления врачи удалять не рекомендуют. Солкодерм нельзя применять: в случае малигнизации новообразований или. Дермавит и Суперчистотел для лечения без рецидивов. Этот препарат помогает вылечить как папилломы, так и бородавки . Нередко используется суперчистотел от кондилом. Несмотря на то, что данный препарат не имеет ничего общего с реальным растением и состоит из щелочей и прочих элементов, он. Суперчистотел лечение кондилом. Суперчистотел — это сильнодействующее химическое средство, которое Применяется для лечения новообразований, вызванных вирусом папилломы человека, — простых бородавок. Суперчистотел от кондилом, папиллом и бородавок помогает бороться с такими проявлениями ВПЧ. . Лечение папиллом суперчистотелом подробно описывает инструкция по применению от бородавок и . Фото препарата представлено выше. Длительность терапии обусловливается размером дефекта и. Удаление кондилом суперчистотелом видео. Суперчистотел - копеечное средство для удаления бородавок и папиллом в домашних . При лечении Суперчистотелом возникает жжение и небольшая болезненность в месте нанесения. Лечение кондилом подобными агрессивными веществами должен проводить . На фото: аппарат Сургитрон. 6)Удаление скальпелем. Устаревшая методика. . Как избавиться от кондилом при беременности и другие вопросы беспокоят пациенток, которые в период вынашивания ребёнка обращаются к врачу с. Суперчистотел — эффективное средство от папиллом. Содержание. Особенности препарата и его воздействия на папилломы. . Почему же бальзам Суперчистотел столь эффективное средство? Все очень просто: он изготовлен на основе экстракта чистотела, щелочей и кислот. Как известно, растение чистотел. Фото: медикаментозное лечение. . Суперчистотел от папиллом. Суперчистотел отлично зарекомендовал себя в борьбе с различными видами новообразований. . Суперчистотел – эффективное средство, которое при правильном применении поможет избавиться от папилломы. Но важно помнить, что любое.

как вывести шипицу йодом

как вывести шипицу йодом

как вывести шипицу йодом

>>>ПЕРЕЙТИ НА ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ >>>

Что такое как вывести шипицу йодом?

Используя Papiderm, вы навсегда избавитесь от новообразований, вирус в вашем организме будет подавлен, а иммунная система – восстановлена. Преимуществом перед некоторыми препаратами является то, что организм не привыкает. Даже после того, как прекратите его употреблять, вирус не будет проявляться снова, поскольку ваша иммунная система может уже самостоятельно справиться с проблемой.

Эффект от применения как вывести шипицу йодом

Всем советую, главное соблюдать инструкцию по применению, не пропуская приём.

Мнение специалиста

2 года назад у меня на шее начали появляться бородавки. Очень они мне доставляли дискомфорт, да портили внешний вид. Я перепробовала очень много аптечных и народных средств, но ничего не помогало. Но пол года назад моя сестра вычитала в интернете про Папидерм. Я приобрела капли и начала лечение строго по инструкции. Внутрь по 10 капель вместе с водой, а снаружи просто наносила на кожу. И вот итог, ни оной бородавки уже пол года.

Как заказать

Для того чтобы оформить заказ как вывести шипицу йодом необходимо оставить свои контактные данные на сайте. В течение 15 минут оператор свяжется с вами. Уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 3-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении.

Отзывы покупателей:

Даша

Две недели назад с помощью средства Папидерм избавилась от всех папиллом на теле. Убирает всё это очень быстро и не портит здоровую кожу как это делает чистотел, я поэтому и искала альтернативное вещество, это лучшим вариантом оказалось. Удобно наносить, при том экономное очень, достаточно капли и папилломы нет. Стоит препарат дёшево, это тоже большой плюс.

Елена

Решила поделиться своей историей избавления от бородавок, быть может, она кому-то окажется полезной. У меня появилась эта зараза сначала на одном пальце, потом еще на нескольких, на ноге тоже была парочка наростов. Купила Папидерм, очень меня его описание привлекло, начала применять по инструкции и сразу заметила, что бородавки уменьшаться начинают, как бы ссыхаются. А потом и вовсе исчезли.

Капли Папидерм имеют ряд преимуществ перед прочими препаратами: натуральный состав, не вызывающий побочных эффектов; эффективное удаление папиллом независимо от их месторасположения; полное уничтожение вируса папилломы человека; минимизация риска развития рака шейки матки; высокая эффективность, доказанная на практике и клинически. Где купить как вывести шипицу йодом? 2 года назад у меня на шее начали появляться бородавки. Очень они мне доставляли дискомфорт, да портили внешний вид. Я перепробовала очень много аптечных и народных средств, но ничего не помогало. Но пол года назад моя сестра вычитала в интернете про Папидерм. Я приобрела капли и начала лечение строго по инструкции. Внутрь по 10 капель вместе с водой, а снаружи просто наносила на кожу. И вот итог, ни оной бородавки уже пол года.
Йод против шипицы. Шипицы – желтоватые новообразования, появляющиеся на ладонях и ступнях. Шипицы на ступнях легко поддаются лечению как при проведении лечебной процедуры, так и в домашних условиях. Как вывести шипицу йодом? Йод – это прекрасное противомикробное средство, также обладает способностью прижигать, таким образом, очень рекомендуется против бородавок и папиллом. Так как жидкость достаточно быстро всасывается кожей, для быстрейшего выздоровления, стоит мазать проблемное. Нередко люди проводят лечение шипицы народными средствами в домашних условиях. Особенности применения алоэ, чистотела, уксуса, лука и йода при шипице. Лечение нароста при помощи магических заговоров. Йодом вывести шипицу? Очень сомневаюсь, что возможно. Но вообще говоря, вывести её совсем нетрудно. Пойдите в аптеку и спросите там "Чистотел" (или "Супер-чистотел" какой-нибудь). Вам дадут что-то вроде пробничка духов на картонке. Это не настой лекарственной травы с одноименным. Лечение шипицы с помощью экстракта чистотела. Его можно приобрести в аптеке вашего города. Если достаточно этой жидкостью намазать шипицу на руке или на ноге 3-5 раз, ее можно вывести окончательно. • Как удалить шипицу в домашних условиях. Чтобы удалить шипицу, нужно добраться до ее . Как вывести шипицу в домашних условиях медикаментами. . Шипица: лечение йодом. Вылечить шипицу можно, ежедневно обрабатывая образование спиртовым раствором йода. Смазывать бородавку. Лечение йодом. Йод – один из доступных антисептических препаратов, который можно купить на аптечном прилавке. Он эффективен при избавлении от различных видов папиллом, в том числе и от шипиц на ранней стадии их развития. Как удалить шипицу, возникающую на руках или ногах. На самом деле шипицы — это народное название. Правильное медицинское обозначение данного новообразования — подошвенная бородавка. Старый добрый йод, мне очень помог и здоровье сохранить, и время, и деньги. Однако, хочу вас предупредить, от не умеренного использования йода, можно получить серьёзный химический ожог, поэтому, благоразумие вам в помощь. Год выпуска/покупки: 2017. Общее впечатление: можно избавиться от. Вывести шипицу народными средствами легко. Способ не поможет избавиться навсегда от ВПЧ, который является . Народное простое средство для избавления от шипиги — йод. Смазывайте им нарост каждый день, чтобы вывести недуг. Он подсохнет, самостоятельно отойдет.
http://www.celko.eu/pics/lechenie_papillom_v_Gudermese8522.xml
http://www.sydspanien.dk/files/fckeditor/lechenie_papillom_v_Dubne4174.xml

http://compmus.org/images/udalenie_shipitsy_narodnymi_sredstvami7836.xml
http://backupcenters.com/userfiles/udalenie_shipitsy_lazerom_rebenku8659.xml
Всем советую, главное соблюдать инструкцию по применению, не пропуская приём.
как вывести шипицу йодом
Используя Papiderm, вы навсегда избавитесь от новообразований, вирус в вашем организме будет подавлен, а иммунная система – восстановлена. Преимуществом перед некоторыми препаратами является то, что организм не привыкает. Даже после того, как прекратите его употреблять, вирус не будет проявляться снова, поскольку ваша иммунная система может уже самостоятельно справиться с проблемой.
Бородавка на коленке имеет вирусное происхождение. Новообразование доброкачественное и в большинстве случаев не склонно к перерождению в злокачественную форму, что делает нарост безопасным для жизни пациента. Причины возникновения бородавок на коленя. Бородавка на колене — одна из излюбленных локализаций таких наростов. Они могут появляться у детей и взрослых, поскольку имеют вирусную природу и легко передаются от больного к здоровому. Существует множество методов лечения. Бородавка на коленке или на руке появляется всегда неожиданно. Бородавки могут как незаметно появиться, так и исчезнуть. Они могут быть одиночными, а могут размножаться, занимая всё больше участков тела. Бородавки чаще всего появляются на локтях, кистях рук, подошвах, коленях, на . Избавиться от них можно как в косметологических кабинетах, так и вывести . Их нужно наложить на бородавку и перевязать бинтом. Обычно хватает 3 - 4 таких. Симптомы бородавок на коленях. Бородавки обычно появляются как грубые . Бородавки на коленях не вызывают боль и не сковывают движений. . Как только этот срок пройдет, бородавка появляется на коленке в виде светло-розового или коричневого бугорка. Вирус, который проникает в организм, может. Делюсь собственным опытом удаления бородавок в домашних условиях. Как избежать ошибок? . Куполообразные (самые распространенные) – на губах, ногах, в области колен, на спине. Как убрать бородавки с рук и тела при помощи современной медицины: Криотерапия – удастся свести образование с. Содержание: Разновидности бородавок. Медицинское удаление бородавок. Народные рецепты удаления бородавок. Очень много людей сталкиваются с такой неприятностью, как бородавки. Бородавка на коленке у ребенка. Профилактика. Бородавки на различных частях тела появляются неожиданно и доставляют . Бородавка на коленке у ребенка. Детям, которые не достигли пятилетнего возраста, не рекомендуется использовать хирургические методы лечения бородавок на колене, особенно.

как вывести шипицу на ладони

как вывести шипицу на ладони

как вывести шипицу на ладони

>>>ПЕРЕЙТИ НА ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ >>>

Что такое как вывести шипицу на ладони?

Папилломы появляются вследствие попадания в организм с ослабленным иммунитетом вируса папилломы. Затем это приводит к появлению на коже родинок, бородавок и т.д. Несмотря на внешнее проявление вируса, он поражает организм изнутри. Новообразования могут появляться также в носу, ротовой полости, внутренних органах, а также половых органах. Для того, чтобы избавиться от этой проблемы, существует отличное средство - Papiderm от папиллом и бородавок.

Эффект от применения как вывести шипицу на ладони

Перед началом лечения следует выполнить некоторые подготовительные действия. В первую очередь следует очистить кожные покровы от любых видом загрязнений, отмерших клеток эпителия. Многие специалисты рекомендуют распарить проблемные участки кожи и использовать скраб. После этого несколько капель препарата нужно нанести непосредственно на нарост. Втирать средство не обязательно (оно само должно впитаться в дерму). Такое воздействие придется проводить 3-4 раза в день (желательно через равные промежутки времени).

Мнение специалиста

Решила поделиться своей историей избавления от бородавок, быть может, она кому-то окажется полезной. У меня появилась эта зараза сначала на одном пальце, потом еще на нескольких, на ноге тоже была парочка наростов. Купила Папидерм, очень меня его описание привлекло, начала применять по инструкции и сразу заметила, что бородавки уменьшаться начинают, как бы ссыхаются. А потом и вовсе исчезли.

Как заказать

Для того чтобы оформить заказ как вывести шипицу на ладони необходимо оставить свои контактные данные на сайте. В течение 15 минут оператор свяжется с вами. Уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 3-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении.

Отзывы покупателей:

Tata

Свела Папидермом папилломы, а у меня их очень много было, уж не знаю, где и как подцепила. Грешу на бассейн, достаточно часто туда хожу. Препарат мне посоветовал товарищ, он им тоже пользовался. Купила и я Папидерм, и уже после недели использования папиллом почти не осталось, а чуть позже кожа окончательно очистилась. Я довольна, пишу вот положительный отзыв.

Маша

Избавление от папиллом на коже – это еще не решение проблемы, поэтому важно еще и устранить саму причину их появления. Чтобы этого добиться, нужно избавиться от вируса, который провоцирует их появление, при этом достигнуть результата нужно повышением иммунитета организма. Только так заболевания будет излечено без рецидива в дальнейшем. Доктора рекомендуют Papiderm даже для тех, у кого заболевание только на начальной стадии. При том цена Papiderm является доступной для большинства.

Если Вам всё ещё кажется, что Папидерм – развод, смею Вас в этом разубедить. Я раньше тоже не доверял лекарствам, которые продаются в Интернете. Для меня было очевидно, что только в аптеке можно купить качественный препарат. Когда у меня появилось несколько больших папиллом, я задался целью найти хорошее средство. Конечно же, пошёл в аптеку, и за пару месяцев испробовал всё, что там было… Денег потратил немерено, а результата как такового не получил. Знакомый прислал мне ссылку на сайт производителя Папидерма. Цена и отзывы привлекли меня больше всего. Во-первых, он стоил дешевле тех лекарств, что уже покупал раньше. Во-вторых, все покупатели остаются довольны результатом. Спустя месяц я тоже присоединяюсь к довольным клиентам! Моя проблема решена на 100%! Все папилломы пропали, и даже улучшилось общее самочувствие. Где купить как вывести шипицу на ладони? Решила поделиться своей историей избавления от бородавок, быть может, она кому-то окажется полезной. У меня появилась эта зараза сначала на одном пальце, потом еще на нескольких, на ноге тоже была парочка наростов. Купила Папидерм, очень меня его описание привлекло, начала применять по инструкции и сразу заметила, что бородавки уменьшаться начинают, как бы ссыхаются. А потом и вовсе исчезли.
Появившись на ладони, шипица может по внешнему виду напоминать обычную мозоль. . Как вывести шипицу на пальце в домашних условиях? Удалить шипицу в домашних условиях можно попробовать при помощи рецептов народной медицины. Предварительно пациенты должны получить консультацию у своих. Как вывести шипицу на пальце без применения аптечных препаратов? Это можно сделать с помощью народных средств. Перед их применением желательно проконсультироваться с врачом, чтобы избежать негативных последствий такого. Как лечить шипицу на пальце руки народными методами. . Это единственный способ предупредить возникновение рецидива бородавок на ладони или пальцах. . С его помощью легко вывести шипицу на руке без риска рецидива. Шипица на пальце руки возникает после проникновения в организм вируса папилломы человека. . Шипица – весьма неприятное образование на пальцах рук, причиняющее боль и создающее неудобство. Причины появления шипицы на руке. Шипица – обиходное название обыкновенной бородавки, имеющей вирусное . Лечение в домашних условиях. К самым разнообразным методам прибегают люди в попытках вывести шипицу с пальца руки: от лечения соками растений и химическими веществами. Шипица на ладони или руке в большинстве случаев локализуется в области пальцев, вокруг ногтей, на подушечках или боковых сторонах кисти. Иногда возникает несколько бородавок, которые сливаются в один болезненный участок кожи. Вирус способен провоцировать появление наростов одновременно в. Как в домашних условиях вывести, убрать шипицу на руке (пальце) быстро и безболезненно? Шипица является одной из разновидностей бородавок. У нее шероховатая поверхность, состоящая из большого количества маленьких шипов, которые создают неприятные болевые ощущения. На руках такие. Шипица на ладони или стопе внешне похоже на вульгарную бородавку (является ее разновидностью), но имеет более крупные . Как вывести шипицы на пальцах руки и ногах? На ступнях ног или на руке могут появляться различные наросты в виде мозолей или бородавок, которые причиняют много неудобств и. Шипица – это разновидность бородавки, уплотнение в виде узелочка белого, прозрачного цвета. Новообразование вызвано вирусом папилломы, при отсутствии терапии может увеличиваться в размерах.
http://parkety-patemal.sk/files/udalenie_borodavok_lazerom_izhevsk_lenina_1004453. xml
http://jnnycc.org/userfiles/preparaty_dlia_udaleniia_borodavok_i_papillom9841.xml
http://nursingjobsonline.net/userfiles/lekarstvo_ot_papillom_i_rodinok4775.xml
http://appletechsolutions.com/userfiles/papilloma_lekarstvo_tsena2875.xml
http://parkety-patemal.sk/files/udalenie_borodavok_pavshinskaia_poima4255.xml
Перед началом лечения следует выполнить некоторые подготовительные действия. В первую очередь следует очистить кожные покровы от любых видом загрязнений, отмерших клеток эпителия. Многие специалисты рекомендуют распарить проблемные участки кожи и использовать скраб. После этого несколько капель препарата нужно нанести непосредственно на нарост. Втирать средство не обязательно (оно само должно впитаться в дерму). Такое воздействие придется проводить 3-4 раза в день (желательно через равные промежутки времени).
как вывести шипицу на ладони
Папилломы появляются вследствие попадания в организм с ослабленным иммунитетом вируса папилломы. Затем это приводит к появлению на коже родинок, бородавок и т.д. Несмотря на внешнее проявление вируса, он поражает организм изнутри. Новообразования могут появляться также в носу, ротовой полости, внутренних органах, а также половых органах. Для того, чтобы избавиться от этой проблемы, существует отличное средство - Papiderm от папиллом и бородавок.
Как выглядят и почему возникают юношеские бородавки на руках? Методы удаления и лекарственного воздействия на новообразования. Оглавление. 1 Как выглядят плоские бородавки? 2 Мнение врачей о самых эффективных методах лечения бородавок и папиллом. Плоские юношеские или ювенильные бородавки – это новообразования на коже, немного возвышающиеся над ее поверхностью. м. Молодежная. неплохо. Лазеродеструкция моллюсков, бородавок. . Лечение бородавок лазером диаметром до 0, 5 см от 1 до 3 шт. за 1 шт). Бородавка: причины появления, виды, диагностика и лечение. Бородавка – локализованное преимущественно доброкачественное образование, вызванное гиперплазией эпидермиса. Папилломатозные разрастания и папулы. Бородавки – часто возникающие кожные заболевания. Своему распространению они обязаны вирусной природе. Выделяются такие типы бородавок: остроконечные. Лечение бородавок — симптомы, причины и диагностика заболевания. . Лечение бородавок на разных частях тела лучше начать с использования недорогих препаратов. Если сразу начать удаление лазером – высок риск, что останется рубец. Появление бородавок на детских руках вызывает тревогу у родителей. Узелки на коже выглядят некрасиво, мешают одеваться. Часто малыши ковыряют их ногтями. Как известно, появление трещин – прямой путь для проникновения в. Лечение плоских бородавок. Юношеские бородавки нередко исчезают без специфического лечения, этот процесс может затягиваться на длительный период – до нескольких лет. Склонность к распространению по телу. Плоские бородавки – это небольшие наросты, которые практически не возвышаются над остальным эпидермисом.

Лечение бородавок

Внутриочаговая интерферонотерапия 

Вирус папилломы человека (ВПЧ)

На сегодняшний день выявлено более 100 видов вирусов папилломы человека (ВПЧ), которые поражают кожу и слизистые оболочки, провоцируя развитие изменений в виде папилломатозных разрастаний. Папилломавирусная инфекция на коже человека проявляется в виде бородавок, их частота у взрослых составляет 7—12%, у детей школьного возраста возрастает до 10—20 % .

Как передается ВПЧ?

ВПЧ может передаваться при прямом или непрямом контактах с больным, характерен процесс аутоинокуляции*, обеспечивающий групповое распространение бородавок.

Инкубационный период в среднем длиться от 1 до 6 месяцев, в отдельных случаях может продлиться свыше 3 лет.

Виды кожных бородавок

Современная медицинская классификация различает следующие виды бородавок:

  • плоские бородавки (или юношеские),
  • обыкновенные, или вульгарные бородавки и их разновидность - подошвенные бородавки (или шипицы),
  • нитевидные бородавки (или акрохорды),
  • остроконечные кондиломы (или генитальные бородавки),
  • старческие бородавки, или возрастные (или себорейный кератоз).

 

Методы лечения

 

Существует достаточно много методов для лечения бородавок, которые подразделяются на деструктивные, химические и иммунотропные. В зависимости от ситуации, пациенту подбирается определенный метод терапии. Здесь учитываются такие важные моменты, как локализация, первичный или рецидивный характер процесса, а также площадь очагов поражения. Высокий риск рецидивирования отмечается при распространенных бородавках (площадью более 2 см²), при подошвенных бородавках, при околоногтевой локализации. Особый подход требуется к новообразованиям, рецидивировавшим после первичной терапии. В случаях неоднократного рецидивирования бородавок после различных методов лечения, рекомендуется специальная процедура - внутриочаговая   интерферонотерапия с применением препарата - рекомбинантного интерферона-α.

 

В нашей клинике для проведения внутриочаговой интерферонотерапии используется   препарат рекомбинантного ИФН-α2b: реаферон ЕС. Данный препарат вводится через 1-2 дня в очаг (под бородавку). При множественных бородавках дозу препарата вводят под 2—3 очага, последующие инъекции вводят под разные бородавки. Курс лечения составляет от 6 до 8 инъекций. Переносимость интерферонотерапии у всех пациентов удовлетворительная, через 3—4 часа после инъекции возможно повышение температуры тела до 37,5—38,7 С°. Повышенная температура тела может продержаться до 5 часов, после чего отмечается   ее   снижение до нормы. С каждой   последующей инъекцией температура будет повышаться в меньшей степени. Для устранения   побочных явлений (снижение температуры тела, устранение мышечной и головной боли) врач назначает пациенту парацетамол или ибуклин.

 

 По окончании   курса лечения бородавки уменьшаются в размере. Через 2 месяца после окончания терапии, при контрольном осмотре наблюдается полный регресс и выздоровление.

 

 

 


 Отличительными результатами данного метода является   малая травматичность, хорошая переносимость и высокие косметические результаты. Бородавки регрессируют без изъязвления и образования рубцовых изменений, что особенно важно при множественных бородавках, локализующихся, как правило, на открытых участках кожи. Отдельно необходимо подчеркнуть атравматичность метода при локализации процесса вокруг ногтевых валиков, так как использование деструктивных методов при данной локализации может привести к травмированию ногтевой пластины и матрицы ногтя. 

 

 

*- АУТОИНОКУЛЯЦИЯ (от греч. autos—сам и лат. inoculatio—прививка), буквально—• самопрививка, термин, предложенный Райтом (А. Е. Wright), для обозначения спонтанной (самопроизвольной) иммунизации организма микробами и их продуктами, поступающими в кровь из местного очага инфекции.

close

бородавки у мужчин лечение

бородавки у мужчин лечение

бородавки у мужчин лечение

>>>ПЕРЕЙТИ НА ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ >>>

Что такое бородавки у мужчин лечение?

В начале этого года я заказала Папидерм, в сравнении со многими другими, это средство бережёт здоровую кожу и в тоже время быстро убирает бородавки и папилломы. Когда-то чистотелом пользовалось, но он травмирует здоровую кожу, а с этим у меня таких проблем нет. Довольно просто использовать, много наносить не нужно и от папиллом потом и следа не остаётся.

Эффект от применения бородавки у мужчин лечение

Многие люди откладывают лечение папиллом на потом, так как на первой стадии данные кожные образование могут не беспокоить. Однако с течением времени они разрастаются, появляются неприятные симптомы (зуд, жжение), поэтому надеется на самоисцеление не стоит. Средство Папидерм быстро и эффективно избавляет от папилломы независимо от стадии заболевания. Оно действует следующим образом: усиливает сопротивляемость организма и предотвращает образование раковых клеток; блокирует размножение вируса; разрушает и устраняет имеющиеся папилломы и бородавки; избавляет от всех новообразований вирусного характера; устраняет симптоматику; блокирует прочие инфекции, которые есть в организме.

Мнение специалиста

Как работает Папидерм: Прекращает подпитку тканей папилломы, вызывает некротизацию дефекта. Подавляет развитие папилломавируса человека (к сожалению, полностью уничтожить патогенные организмы невозможно). Предотвращает повторное заражение и защищает от воздействия грибков, бактерий.

Как заказать

Для того чтобы оформить заказ бородавки у мужчин лечение необходимо оставить свои контактные данные на сайте. В течение 15 минут оператор свяжется с вами. Уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 3-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении.

Отзывы покупателей:

Алена

Папилломы представляют собой неприятные новообразования на кожных покровах. Они разрушают организм человека изнутри, поражают внутренние органы и могут привести к возникновению раковых заболеваний. Чтобы не допустить серьезных последствий, необходимо тщательно подойти к выбору лекарственного средства для лечения. В нашей аптеке можно купить средство от папиллом Papiderm, избавляющие организм человека от опасного папиллома-вируса. Это новое слово в вопросе ликвидации новообразований. Без ожогов, побочных эффектов и максимально быстро. Папидерм от папиллом поможет вернуть здоровье и психологический комфорт.

Варя

Препарат «Папидерм» приостанавливает действие вируса как внутри организма, так и снаружи. Именно поэтому средство столь эффективное и популярное. По словам специалистов, оно не только устраняет следствие самого заболевания, но также и активно борется с причиной его развития.

До недавних пор даже не догадывался, что могло бы значить “ВПЧ”. У меня появилось на теле несколько наростов, собирался удалять их в ближайшем косметическом кабинете. После осмотра врач дал направление на анализы, что-то там ему не понравилось… По итогу выяснили, что эти наросты могут превратиться в онкологию, поэтому лечить их нужно было немедленно. Доктор посоветовал купить Папидерм, потому что он намного безопаснее хирургического вмешательства. Где купить бородавки у мужчин лечение? Как работает Папидерм: Прекращает подпитку тканей папилломы, вызывает некротизацию дефекта. Подавляет развитие папилломавируса человека (к сожалению, полностью уничтожить патогенные организмы невозможно). Предотвращает повторное заражение и защищает от воздействия грибков, бактерий.
Консервативное лечение остроконечных кондилом у мужчин, появившихся на . Бородавки могут расти в мочеиспускательном канале мужчины. . У мужчин половые бородавки этого типа часто появляются при сифилисе второй стадии. Заболевание имеет характерные клинические симптомы, поэтому врач. Лечение папилломы у мужчин без кардинального вмешательства заключаются в приеме медикаментозных средств. . Если вскочили бородавки на члене, лечение данным препаратом заключается в обработке очага поражения вирусом в количестве, которое не превышает двух раз в сутки. Рекомендуется производить. Генитальные бородавки у мужчин и женщин: методики лечения и фото заболевания, прогноз болезни. Вирус папилломы человека способен доставить массу неудобств любому человеку, особенно, если речь идет об образовании кожных наростов. Генитальные бородавки являются наиболее неприятным. Генитальные бородавки. Содержание статьи: Причины. Симптомы аногенитальных бородавок у женщин и мужчин. . Симптомы аногенитальных бородавок у женщин и мужчин. Папилломавирус поражает эпителиальные клетки, вызывая изменение их структуры (доброкачественные или. Бородавки у мужчин в паху: симптомы развития и методы лечения. В силу слабого иммунитета, люди часто сталкиваются с такой проблемой как бородавки, или же папилломы, а понервничать заставляют еще больше, в особенности женский пол. Они могут доставлять некий дискомфорт, в плане внешнего вида. Лечение бородавок. Бородавки удаляют либо медикаментозно, либо механическим способом. Учитывая их вирусную сущность, с ними борются соответствующим образом: назначают противовирусные (оксолиновую и теброфеновую) мази. Генитальные бородавки ВПЧ у мужчин и женщин. Генитальные бородавки в медицине называют остроконечными кондиломами, вызванные вирусом папилломы человека (ВПЧ). Генитальные бородавки ВПЧ у мужчин и женщин. Генитальные бородавки в медицине называют остроконечными кондиломами, вызванные вирусом папилломы человека (ВПЧ). Как избавиться от бородавок, какие существуют традиционные и современные методы лечения, профилактика заболевания и о многое другое вы узнаете в нашей статье. Бородавка — это доброкачественное образование на коже. Обычные бородавки могут не доставлять никакого дискомфорта человеку, так как являются просто некрасивым наростом на коже. Но если мы говорим о генитальных бородавках, то тут все куда серьезней.
http://krakowska98.com/zdjecia/fck/lecheniia_papillomy_kakie_lekarstva8112.xml
http://fedoro.ru/upload/lecheniia_papillomy_kakie_lekarstva3684.xml

http://dsacare.com/admin/uploads/file/papillomy_v_uretre_u_zhenshchin_lechenie9690.xml
http://www.gruppoviras.com/img_pagine/lechenie_papillom_aloe3001.xml
Многие люди откладывают лечение папиллом на потом, так как на первой стадии данные кожные образование могут не беспокоить. Однако с течением времени они разрастаются, появляются неприятные симптомы (зуд, жжение), поэтому надеется на самоисцеление не стоит. Средство Папидерм быстро и эффективно избавляет от папилломы независимо от стадии заболевания. Оно действует следующим образом: усиливает сопротивляемость организма и предотвращает образование раковых клеток; блокирует размножение вируса; разрушает и устраняет имеющиеся папилломы и бородавки; избавляет от всех новообразований вирусного характера; устраняет симптоматику; блокирует прочие инфекции, которые есть в организме.
бородавки у мужчин лечение
В начале этого года я заказала Папидерм, в сравнении со многими другими, это средство бережёт здоровую кожу и в тоже время быстро убирает бородавки и папилломы. Когда-то чистотелом пользовалось, но он травмирует здоровую кожу, а с этим у меня таких проблем нет. Довольно просто использовать, много наносить не нужно и от папиллом потом и следа не остаётся.
Обычная бородавка возвышается над поверхностью кожи, а шипица на вид . Какой способ лечения шипицы самый быстрый и может ли она пройти самостоятельно? Вероятность того, что нарост на стопе исчезнет сам по себе есть, но. Coвpeмeнныe мeтoды лeчeния шипицы нa нoгe? Чтoбы вывecти шипицy нa нoгe быcтpo и эффeктивнo, иcпoльзyютcя мaлoинвaзивныe, мeдикaмeнтoзныe и нapoдныe cпocoбы вывeдeния пaтoлoгичecкoгo oбpaзoвaния. Лeкapcтвeнныe cpeдcтвa имeют пpoтивoвиpycнoe дeйcтвиe, влияют нa пpичинy oтклoнeния,. Особенности бородавки-шипицы: симптоматика и признаки. Причины появления. . Шипица на ноге: специфика недуга и популярные способы лечения. 14.03.2018. Фото: Шипица на ноге (подошвенная бородавка). Подошвенная бородавка, или шипица. Советы врача. Подошвенные бородавки, или шипицы – это вид бородавок, возникающий на подошвах стоп и на ладонях. Причина - вирус ВПЧ. Из всех кожных бородавок встречается в 30%. Подошвенная бородавка (она же в народе шипига, шапига или шипица . Лечение бородавок на первом уровне. При небольшой глубине повреждения и единичных подошвенных бородавках применяются более щадящие. Шипица, как и все бородавки, представляет собой доброкачественное . Лечением шипиц занимается врач дерматолог, который может не только назначать медикаментозное лечение, но и проводить удаление нароста. Также для. Можно ли избавиться от бородавок и шипиц самостоятельно. Современные методы удаления папилломы. Остроконечная кондилома и онкология. Бородавка, шипица чаще встречается в детском и подростковом возрасте. . Очень важно для дальнейшего лечения отличить подошвенную бородавку от участка. Сухая бородавка, также известная как шипица или подошвенная, представляет собой шершавый нарост, которой возникает на внутренней стороне ладоней и стоп и пальцев. Причиной появления папилломы служит заражение. Подошвенная бородавка: лечение в домашних условиях, как . Почему появляются шипицы? Бородавки на стопе – это доброкачественные новообразования вирусной природы. Причиной их появления является.

Лечение папиллом нехирургическое | Прима Медика

Папиллома (шипица)

Причиной образования папиллом является инфицирование разнообразными вирусами папилломы человека (ВПЧ). Семейство вирусов папилломы человека содержит более 100 типов.

Различные типы ВПЧ вызывают формирование новообразований кожи и слизистых оболочек, таких как вульгарные плоские бородавки, урогенитальные остроконечные кондиломы, папилломатоз гортани, эритроплакия слизистых, а также плоскоклеточный рак кожи и слизистых, рак шейки матки и др.

Передача ВПЧ происходит контактным путем – при телесном контакте с больным или носителем вируса, или через предметы, которыми он пользовался.

Виды бородавок

  1. Обыкновенные (вульгарные), чаще всего локализуются на кистях рук.
  2. Подошвенные или ладонные бородавки – вульгарные бородавки, располагающиеся на коже подошв или ладоней. Иногда достигают больших размеров, часто рецидивируют, могут быть болезненными.
  3. Плоские (юношеские) имеют вид плоских узелков, которые располагаются на тыльной поверхности кистей рук, а также на коже лица.
  4. Остроконечные кондиломы - проявления папилломавирусной инфекции на коже половых органов, в паховых, межъягодичных складках, вокруг анального отверстия. Часто имеют сосочковое строение и внешне напоминают цветную капусту.

Чаще всего инфицирование ВПЧ происходит в детстве, но может случиться в любом возрасте. Заражение одним типом вируса не предохраняет от повторного заражения другими типами.

Большинство бородавок склонны к самоизлечению. Однако некоторые могут доставлять неудобства, затруднять функции или представлять косметический дефект, например, на лице. Потенциальную опасность вирусного образования можно определить, сделав специальные тесты: точно определив подтип вируса, так как разные типы несут разный онкогенный риск, а также изучив при помощи молекулярных тестов потенциал инфицированных клеток к злокачественной трансформации.

В настоящее время врачи предлагают множество различных вариантов лечения папилломавирусной инфекции, но встречаются особенно упорно протекающие или часто рецидивирующие разновидности вирусных кожных новообразований, которые требуют особенного лечебного подхода.

Медицина не располагает эффективным противовирусным лечением, способным полностью изгнать вирус папилломы человека из организма, но некоторые из доступных методов лечения способны подавлять жизненный цикл вируса.

Методы лечения бородавок

  1. Методы, основанные на химической деструкции зараженного эпителия - деструктивные методы лечения.К этим методам относятся использование химических средств, таких, как салициловая кислота, ТСА, такие лекарственные препараты как солкодерм или кондилин, и другие.
  2. Методы физического удаления - криотерапия, лазерная деструкция (СО2-лазер), радиоволновое или хирургическое иссечение в пределах здоровых тканей.
  3. Топическое лекарственное лечение – некоторые лекарственные препараты, введенные в пораженные ткани, способны предотвращать дальнейшее размножение инфицированных клеток и приводить к полному отмиранию новообразования.
  4. Иммунотерапия с применением вакцин и имиквимода. Данный препарат выпускается в виде крема, он стимулирует провоспалительный ответ через индукцию синтеза и высвобождения интерферона (ИФН)-α, фактора некроза опухоли-α и интерлейкина (ИЛ) -12, а также активирует естественные клетки киллеры (NK). Должен применяться только по назначению врача.

Специалистами медицинского центра «ПримаМедика» применяется комплексный подход к лечению кожных проявлений папилломавирусной инфекции. По сравнению с использованием единственного метода лечения, сочетание различных типов воздействий на пораженную кожу позволяет добиться стойкого ответа и сократить риск рецидива образований кожи.

Наиболее часто мы сочетаем крио- или радиоволновую деструкцию с применением специальных мазей и отшелушивающих растворов, а также с иммунотерапией. Такой подход позволяет справляться даже с упорно-рецидивирующими подошвенными бородавками.

Бородавки и папилломы являются распространённой проблемой, существует множество методов лечения, наши специалисты научились применять их эффективные комбинации, в зависимости от конкретных проявлений и течения заболевания.

Что с шипами?

Художественные изображения коронавируса, подобные этому, стали популярными символами пандемии COVID-19. Иллюстрация Getty Images

Если есть что-то, что большинство из нас узнали о самом коронавирусе, то мы знаем, что он покрыт шипами.

В выпусках новостей о кризисе COVID-19 этот серый шар из пенополистирола, усеянный красными шипами, стал неофициальным логотипом пандемии.

Мы даже видим шипы, как они появляются - с искусственной окраской - на фотографиях с мощных электронных микроскопов.Они опоясывают тело вируса, как драгоценности в короне, отсюда и название этого семейства микробов - corona virus.

С биологической точки зрения, эти шипы критически важны. Они буквально являются точкой контакта наших уязвимых клеток легких с вирусом SARS-CoV-2. Подобно ключевому вырезу для определенного замка, шип аккуратно скользит в соответствующие участки рецепторов, обнаруженных на клетках, выстилающих дыхательные пути наших легких. После закрепления это соединение позволяет всему шаровидному вирусу проскользнуть в клетку.Внутри он делает тысячи копий самого себя. И началась потенциально смертельная инфекция.

Узнайте больше, о SARS-CoV-2 и пандемиях, в этой сопутствующей истории - кратком руководстве по биологии коронавируса.

Подпишитесь на Hutch News, чтобы получать информационный бюллетень с историями и информацией об исследованиях Фреда Хатча.

Тем не менее, у этого всплеска есть качества, которые отличают его от других инфекций, которых опасаются, таких как ВИЧ и грипп, что дает ученым возможный путь к эффективной вакцине или лекарству.Генетически он относительно стабилен по сравнению с поверхностными белками других вирусов, что делает его менее подвижной мишенью для антител или лекарств, предназначенных для его блокирования.

«Это хорошие новости для снижения устойчивости к противовирусным препаратам. Это хорошие новости для разработки вакцины, - сказал доктор Майкл Эмерман, вирусолог из Онкологического исследовательского центра Фреда Хатчинсона в Сиэтле.

Эмерман, исследователь из Фреда Хатча и Вашингтонского университета, является ведущим экспертом в области передачи пандемических вирусов, таких как грипп, ВИЧ и атипичная пневмония, от животных к человеку.Считается, что каждый из этих вирусов в своем эволюционном путешествии произошел от другого вида: грипп от птиц к человеку, ВИЧ от шимпанзе, SARS и его близкий родственник SARS-CoV-2, скорее всего, от летучих мышей.

В геноме коронавируса есть механизм исправления ошибок

Грипп и ВИЧ известны поверхностными структурами, состоящими из белков и сахаров, которые быстро меняют свою форму. Попытки блокировать ВИЧ с помощью вакцины терпели неудачу в течение трех десятилетий из-за способности этого вируса скрываться от иммунной системы человека, в том числе от тех крошечных белков, называемых антителами, которые естественным образом образуются на поверхности ВИЧ.Вирусы гриппа также изменяют форму, потому что они развивают новые поверхностные структуры против антител от вакцин. Это вынуждает производителей вакцин каждые несколько лет менять рецептуру прививок от гриппа против разных штаммов.

Коронавирусы генетически более стабильны, потому что они несут в себе механизм исправления ошибок, которые естественным образом возникают в результате мутации их генетического кода. Все геномы ВИЧ, гриппа и коронавируса состоят из РНК, которая менее стабильна и более подвержена ошибкам, чем ДНК, хранящая нашу собственную генетическую информацию.Все три вируса мутируют, потому что полагаются на РНК, но коронавирусы делают это медленнее.

Таким образом, у исследователей есть основания надеяться, что, если они смогут разработать лечение или вакцину, которая блокирует эти сигнатурные всплески коронавируса, вероятность быстрого побега уменьшится, и вероятность того, что они будут взяты под контроль, будет выше.

Одна вещь, которая отличает появление SARS-CoV-2 от пандемий прошлого, заключается в том, что исследователи теперь оснащены инструментами, которые позволили им в течение нескольких недель после открытия вируса секвенировать его геном и смоделировать белок. структура шипов.Используя криоэлектронные микроскопы, которые дают ученым поразительно точные изображения шипа, мы уже знаем неровный рельеф его поверхности и вероятные пятна на нем, где антитела или лекарства могут закрепить и, возможно, вывести его из строя.

Ученые Фреда Хатча - и исследователи по всему миру - лихорадочно работают над поиском антител, которые естественным образом присоединяют шип SARS-CoV-2, уменьшая его способность так легко проникать в клетки легких. Эти крошечные белки могут быть произведены в лаборатории и использованы в качестве лекарств для блокирования вируса, и они могут послужить основой для новой вакцины или анализов крови, которые покажут предыдущее воздействие вируса.Они могут сыграть решающую роль в борьбе с COVID-19.

Ученые обнаруживают блокаторы шипового белка коронавируса

Пандемический коронавирус SARS-CoV-2 должен проникнуть в наши клетки, чтобы вызвать инфекцию. Он получает доступ, используя теперь пресловутый протеин-шип, но, что типично для вирусов, он должен захватить нашу биологию, чтобы взломать замок. Ученые ищут способы перехватить вирус до того, как он сможет проникнуть внутрь.

Белки вирусных шипов полагаются на ферменты, перехватывающие белок, протеазы, чтобы изменить их форму для входа в клетку.В случае SARS-CoV-2 спайк должен сначала быть перерезан протеазой фурина в определенной точке, прежде чем он защелкнется на рецепторе ACE2 клетки. Затем другая протеаза должна разрезать спайковый белок и инициировать слияние вируса с клеточной мембраной.

Идея, которую преследуют исследователи, состоит в том, чтобы не дать фурину разрезать шип.

Раньше, еще до того, как COVID-19 был официально объявлен пандемией, ученые уже занимались делом фурина, заметив, что аминокислотные последовательности белка-шипа были тревожно похожи на сайт стыковки фурина с мотивом аргинин-аргинин-аланин. -аргинин.Фурин - широко распространенный фермент в организме, потенциально предоставляющий SARS-CoV-2 бесчисленные возможности инфицировать клетки. SARS-CoV, коронавирус, вызвавший вспышку SARS в начале этого столетия, не имеет сайта расщепления фурина, но такие сайты присутствуют у других опасных патогенов, таких как ВИЧ, Эбола, БВРС-КоВ и птичий грипп.

Охота на ингибиторы фурина для клинического использования уже идет полным ходом.

«Есть несколько высокопатогенных вирусов птичьего гриппа, которые иногда заражают людей, и их шипы расщепляются фуринами, поэтому эти вирусы могут воспроизводиться в различных клетках и тканях организма», - объясняет Винсент Раканиелло, вирусолог в Колумбийском университете.Это отделяет их от однолетних вирусов гриппа человека, шипы которых не расщепляются фурином, и может частично объяснить, почему эти вирусы не так патогенны, как птичий грипп.

Если фурин имеет решающее значение для патогенности SARS-CoV-2 и его способности проникать в разные типы клеток, то блокирование протеазы может препятствовать репликации вируса. С этой целью исследователи изучали, действительно ли фурин необходим для инфекции SARS-CoV-2 и снижает ли его активность вирусную нагрузку в клетках.

Фурин как соучастник преступления SARS-CoV-2

В мае группа из Немецкого центра приматов под руководством Стефана Пельманна сообщила, что начальное расщепление субъединиц S1 и S2 спайкового белка имеет важное значение для SARS-CoV-2 проникновение в клетки легких человека и для слияния инфицированных клеток с другими клетками вируса. Это явление слияния, называемое синцитием, вызывается так называемым слитым пептидом, который высвобождается спайком при его расщеплении.

Французская группа сообщила, что клетки, инфицированные SARS-CoV-2, усеяны белками-шипами, которые сливаются с соседями, обладающими поверхностными ферментами ACE2.Слитые клетки были обнаружены в посмертных тканях легких пациентов с COVID-19. Это слияние клеток также наблюдалось в тканях людей, инфицированных коронавирусами, вызывающими SARS и MERS.

Syncytium позволяет инфицированным вирусом клеткам присоединяться к другим клеткам, создавая непрерывные вирусные фабрики из 10-20 клеток. Эта стратегия позволяет вирусу захватывать новые клетки, не попадая в организм, тем самым ускользая от иммунного надзора. Французская группа пришла к выводу, что слияние клетки с клеткой является признаком тяжелой формы COVID-19 и ему способствует TMPRSS2, другая протеаза, участвующая в отсечении шипового белка.

Другая немецкая группа сообщила в июле о доказательствах, подтверждающих важность TMPRSS2 в инфекции, и что репликация SARS-CoV-2 сильно ингибируется синтетическим ингибитором фурина, MI-1851, в клетках дыхательных путей человека.

В препринте, опубликованном на bioRxiv в августе, Винит Менахери из Медицинского отделения Техасского университета и его коллеги сообщили, что удаление сайта расщепления фурина шипового белка из SARS-CoV-2 усилило репликацию в линии клеток обезьяны, но ослабленная репликация в респираторных клетках и патогенез in vivo у хомяков.

«Я ожидал, что то же самое будет справедливо и для SARS-CoV-2 у инфицированных людей», - говорит Пёльманн о результатах для хомяков. Что касается противоречивых данных по клеткам обезьян, исследователи все еще ищут ответы.

Поиск лекарств, блокирующих фурин

Охота на ингибиторы фурина для клинического применения уже идет полным ходом. Тайваньские ученые протестировали четыре ингибитора фурина и других подобных протеаз в клетках человека, инфицированных SARS-CoV-2. Расщепление и слияние клеток были отменены в клетках, обработанных ингибиторами фурина CMK (деканоил-RVKR-хлорметилкетон) и нафтофлуоресцеином, как сообщили авторы в сентябре в Cell .CMK - это пептидный ингибитор, давно используемый в качестве исследовательского инструмента, который конкурирует с фурином за внимание SARS-CoV-2, в то время как нафтофлуоресцеин, новое соединение, используемое в исследованиях, представляет собой низкомолекулярный ингибитор активности фурина.

«Эти два ингибитора снижают не только синцитий, но и производство вирусов», - говорит старший автор Шио-Хвэй Йе из Национальной университетской больницы Тайваня. «Наше исследование подтверждает критическую роль расщепления фурина для активности слияния белка-шипа, но мы также идентифицировали два противовирусных соединения-лидера для разработки лекарств.”

Yeh разработал ряд производных нафтофлуоресцеина для повышения его селективности в отношении фурина. Теперь она планирует протестировать свои производные на моделях мышей, которые экспрессируют человеческий ACE2 .

Гонсало Изагирре, биохимик из Университета Иллинойса в Чикаго, много лет изучал природные ингибиторы фурина, называемые серпинами. Сейчас он работает над разработанным ингибитором фурина серпинового типа, который может блокировать проникновение в клетки синтетического неинфекционного вируса, снабженного шипом SARS-CoV-2.«В случае эффективности, - отмечает он в электронном письме, - этот ингибитор может стать основой потенциального лечения COVID-19».

Уже существуют препараты, ингибирующие протеазу, одобренные для лечения неродственных состояний, которые, по-видимому, влияют на фурин, и биохимик Ричард Ватт из Университета Бригама Янга в штате Юта считает, что стоит изучить возможность перепрофилирования для лечения COVID-19. Например, нелфинавир - это лекарство, одобренное для лечения ВИЧ, которое, по словам Уатта, влияет на фурин. В несвязанном исследовании анемии «мы обнаружили, что ингибитор протеазы ВИЧ может связывать фурин и подавлять его действие», - объясняет Ватт.

Было разработано множество лекарств с целью ингибирования фурина, но ни один из них не дошел до пациентов.

Препарат прочно связывается с каталитическим сайтом фурина, а также с другими протеазами, которые действуют на SARS-CoV-2, как показывают вычислительные исследования его группы и других специалистов, говорит Ватт. Кроме того, в более раннем препринте отмечалось, что нелфинавир действительно действует против SARS-CoV-2, связываясь с его основной протеазой.

Еще одна стратегия может заключаться в объединении блокатора фурина со вторым ингибитором протеазы, например, для TMPRSS2.В июльском препринте Пёльманн и его коллеги пришли к выводу, что TMPRSS2 необходим для SARS-CoV-2 для заражения клеток дыхательных путей человека, и предложили комбинировать TMPRSS2 и ингибитор фурина в качестве противовирусной стратегии.

«Фурин - важный фермент в организме человека. Вы не можете жить без фурина », - говорит Пёльманн. «TMPRSS2 не важен, по крайней мере, для мышей, которые могут счастливо жить без него». Комбинация двух ингибиторов может позволить использовать более низкую дозу блокатора фурина или более быстрый «один-два удара», что требует лишь кратковременного ингибирования фурина.

«Вам нужны ингибиторы как фурина, так и TMPRSS2», - соглашается Ватт. Он предполагает, что это может быть осуществимо при использовании нелфинавира в сочетании с камостатом мезилатом, блокатором TMPRSS2, одобренным в Японии для лечения панкреатита и который, как сообщил Пёльманн, может ингибировать активацию SARS-CoV-2. Существует ряд одобренных ингибиторов TMPRSS2 для состояний, не связанных с коронавирусами. Более того, датское исследование в настоящее время проверяет действие камостата на пациентов с COVID-19.

Перепрофилирование одобренных лекарств для блокирования протеаз, необходимых для вируса, позволит ускорить клинические испытания для проверки их эффективности против SARS-CoV-2 и, возможно, принести пользу пациентам с COVID-19 с помощью новых, столь необходимых противовирусных терапий.Ватт хотел бы испытать нелфинавир на пациентах с COVID-19, но еще не нашел клинического сотрудника или финансирования.

Ограничения вмешательства с фурином

Не все уверены, что блокировка фурина сработает. Группа из Великобритании сообщила в августовском препринте, что повреждение гена фурина в линии эмбриональных клеток человека уменьшает, но не останавливает полностью репликацию SARS-CoV-2. «Мы обнаружили, что удаление гена фурина замедляет слияние клеток, но не предотвращает его», - объясняет по электронной почте иммунолог Лео Джеймс из Кембриджского университета.

«Тот факт, что белок S все еще расщеплялся в клетках, нокаутированных по фурину, предполагает, что могут быть другие протеазы, которые могут занять его место, хотя и менее эффективно», - добавляет он. На первый взгляд, эти результаты - плохая новость для создания антивирусных препаратов, блокирующих фурин. «Даже если соединение достигает 100% ингибирования, оно не предотвращает полностью инфекцию», - говорит Джеймс. Июньское исследование iScience также показало, что ферменты, связанные с фурином, также могут сокращать спайковый белок.

Тем не менее, это не последнее слово.«Я бы сказал, что они использовали неправильные ячейки», - возражает Раканиелло. Клеточные линии от обезьян и клеток эмбриона человека могут задействовать различные протеазы, чтобы выполнять ту же работу, что и фурин, добавляет он, отделяя их от клеток легких человека.

Кроме того, Раканиелло и другие говорят, что, возможно, нет необходимости полностью блокировать SARS-CoV-2 вне клеток. «Ясно, что если вы уберете этот сайт расщепления, вирус все еще сможет воспроизводиться до определенной степени», - говорит Раканиелло. «Может случиться так, что десяти- или 100-кратного снижения выработки вируса будет достаточно для предотвращения инфекции, и вы не можете сказать это по линии клеток.Вам нужно посмотреть на животную модель ».

Отдельная проблема заключается в том, что "фурин играет важную роль в нашей клетке", - говорит Раканиелло, поэтому, если вы заблокируете фермент, "у вас будет связанная с этим токсичность". Было разработано множество лекарств с целью ингибирования фурина, но ни один из них не дошел до пациентов. «Ингибиторы фурина довольно токсичны», - подтверждает Изагирре.

Это их не исключает. Ингибиторы, возможно, можно было бы доставить на короткий период времени, чтобы снизить вирусную нагрузку в критический момент.«Вполне возможно, что ингибиторы фурина применяются только в течение очень короткого периода времени, чтобы уменьшить количество нежелательных побочных эффектов», - соглашается Пёльманн.

Хотя нелфинавир одобрен Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA) для лечения ВИЧ, он еще не одобрен в качестве ингибитора фурина. В настоящее время Watt добивается одобрения FDA для нелфинавира в качестве ингибитора фурина для лечения анемии, вызванной хроническим воспалением, в надежде, что будущие исследования позволят одобрить препарат в качестве ингибитора фурина при других показаниях, таких как инфекции SARS-CoV-2.

Спайковый белок нового вируса короны более гибкий, чем ожидалось

Новые данные о белке Sars-CoV-2 проливают свет на способность вируса инфицировать клетки

Чтобы инфицировать клетки, вирусу необходим спайковый белок на его вирусной поверхности. Ученые из Института биофизики Макса Планка, Института Пауля Эрлиха, Европейской лаборатории молекулярной биологии (EMBL) и Университета Гете во Франкфурте проанализировали спайковый белок в его естественной среде, используя методы визуализации с высоким разрешением и компьютерные методы.В процессе они получили удивительные идеи, в том числе неожиданную свободу передвижения. Полученные данные могут помочь в поисках вакцин и лекарств.

Четыре белка-шипа на поверхности мембраны sars-CoV-2. Если эти белки связываются с рецепторами ACE2 на поверхности клетки, вирус может проникнуть в клетки и размножаться.

© MPI f. Биофизика / фон Бюлов, Сикора, Хаммер

Четыре белка-шипа на поверхности мембраны sars-CoV-2.Если эти белки связываются с рецепторами ACE2 на поверхности клетки, вирус может проникнуть в клетки и размножаться.

© MPI f. Биофизика / фон Бюлов, Сикора, Хаммер

В начале заражения Covid-19 коронавирус Sars-CoV-2 стыкуется с клетками человека, используя шиповидные белки на своей поверхности. Этот белок находится в центре разработки вакцин, потому что они вызывают иммунный ответ у людей. Поэтому группа немецких ученых, в том числе члены Европейской лаборатории молекулярной биологии (EMBL) в Гейдельберге, Института биофизики Макса-Планка, Института Пауля Эрлиха и Университета Гете во Франкфурте, сосредоточились на структуре поверхности вируса, чтобы получить представление. для разработки вакцин и эффективных терапевтических средств для лечения инфицированных пациентов.

Команда объединила технологии криоэлектронной томографии, усреднения субтомограмм и моделирования молекулярной динамики, чтобы управлять анализом молекулярных структур этих белков-шипов в их естественной среде, на интактных вирионах и с разрешением, близким к атомному. Используя современное оборудование для криоэлектронной микроскопии EMBL, было создано 266 криотомограмм примерно 1000 различных вирусов, каждый из которых несет в среднем 40 шипов на своей поверхности. Усреднение субтомограмм и обработка изображений в сочетании с моделированием молекулярной динамики, наконец, предоставили необходимую важную и новую структурную информацию из этих всплесков.

Гибкий стержень

Результаты были неожиданными: данные показали, что глобулярная часть белка-шипа, которая содержит рецептор-связывающую область и механизмы, необходимые для слияния с клеткой-мишенью, соединена с гибкой ножкой. «Верхняя сферическая часть шипа имеет структуру, которая хорошо воспроизводится рекомбинантными белками, используемыми для разработки вакцины», - объясняет Мартин Бек, руководитель группы в EMBL и директор Института биофизики биофизики Макса Планка.«Однако наши выводы о стебле, который прикрепляет глобулярную часть белка-шипа к поверхности вируса, были новыми».

«Стержень должен был быть достаточно жестким, - добавляет Герхард Хаммер из Института биофизики Макса Планка и Института биофизики Университета Гете во Франкфурте. «Но на наших компьютерных моделях и на реальных изображениях мы обнаружили, что стебли чрезвычайно гибкие». Комбинируя моделирование молекулярной динамики и криотомографию, команда определила три сустава - бедра, колена и голеностопного сустава, что придает ножке гибкость.

«Как воздушный шар на веревке, шипы, кажется, движутся по поверхности вируса и, таким образом, могут искать рецептор для стыковки с клеткой-мишенью», - описывает Жакомин Крижнсе Локер, руководитель группы в Институте Пола Эрлиха. результаты. Чтобы предотвратить заражение, в эти «воздушные шары» нацелены антитела. Однако изображения и модели также показали, что весь спайковый белок, включая стебель, покрыт гликановыми цепями - сахароподобными молекулами. Эти цепи обеспечивают своего рода защитную оболочку, которая скрывает шипы от нейтрализующих антител.Еще одно важное открытие на пути к эффективным вакцинам и лекарствам.

Вакцина против COVID-19 приблизится к скачкам

Поскольку эпидемиологи пытаются опередить распространение нового коронавируса COVID-19, разработчики вакцин, такие как Sanofi и Johnson & Johnson, сосредотачиваются на «шиповых» белках, которые покрывают вирусные поверхности. Следование за подсказками в геномах имеет решающее значение для разрушения танго инфекционности, поскольку вирусы встречаются и сливаются с нашими клетками.

Разработчики вакцин уделяют особое внимание молекулярным ландшафтам, в которых вирусы поражают клетки нашей респираторной и иммунной систем.Нацеливание на COVID-19 является особенно сложной задачей, поскольку усилия по разработке вакцины против его родственника, коронавируса SARS (SARS-CoV), вызывают лишь частичные ответы. Но сейчас эти шаги служат отправной точкой для фармацевтики.

Отношения между вирусами и людьми могут показаться сюжетом научной фантастики. Вирусы, от которых мы болеем, могут быть не более чем фрагментами генетического материала, давно заимствованного из геномов человека. Упакованные со своими собственными белками, вирусы возвращаются в наши тела, чтобы сделать больше самих себя.

Зоопарк животных-хозяев

Коронавирусы представляют «серьезную глобальную угрозу здоровью», пишут исследователи из Уханьского университета и Университета Сунь Ятсена в журнале Journal of Medical Virology . Вирусы не новые, и они заражают не только людей. Они вызывают:

  • диарея у свиней, собак и коров
  • лихорадка и васкулит у кошек
  • Лихорадка и анорексия у лошадей
  • тяжелое повреждение легких у мышей
  • Заболевание легких и смерть китов от печеночной недостаточности
  • Инфекция дыхательных путей у птиц (луковицы, воробьи и куры)
Иммунный ответ летучих мышей позволяет им содержать коронавирусы, не заболевая, что делает их опасным резервуаром инфекции.

Некоторые виды распространяют коронавирусы, не заболевая, например верблюды, переносящие MERS, и летучие мыши, переносящие множество вирусов.

Коронавирусы человека до COVID-19

До декабря 2019 года было известно, что шесть коронавирусов заражают людей. Первые два, HCoV-229E и HCoV-OC43, были обнаружены в 1960-х годах. Они вызывают около 30% простудных заболеваний, с редкими сообщениями о случаях пневмонии у пациентов с другими вирусными инфекциями или с ослабленным иммунитетом.

В 2002 г. появился SARS-CoV, а в 2004 г. - HCoV-NL63, который редко вызывает пневмонию и бронхит.ТОРС (тяжелый острый респираторный синдром) стал причиной более 8000 инфекций и 774 смертельных исходов, но у большинства из нас есть антитела к NL63, что указывает на воздействие в прошлом, которое не привело к серьезным заболеваниям.

В 2005 году вышла ХКУ1. Он вызывает пневмонию у детей раннего возраста и 1,5% случаев респираторного дистресс-синдрома у взрослых.

БВРС-КоВ (ближневосточный респираторный синдром) возник в 2012 году на Аравийском полуострове и встречается редко, но может привести к летальному исходу. SARS и MERS демонстрируют зоонозную передачу (другим животным), а также передачу от человека к человеку.

Два коронавируса без пристрастия к человеческому телу также могут быть важны с эпидемиологической точки зрения. HKU2, убивший 24000 поросят на юге Китая от диареи в 2017 году, является первым «переносом» коронавируса летучих мышей на домашний скот. А CoV / SW1 белухи, хотя и имеет отдаленное отношение к патогенам человека, может выявить, как вирусы летучих мышей проникают в морских существ.

Коронавирусы бывают четырех родов (эквивалент « Homo » в « Homo sapiens »): альфа, бета, гамма и дельта.COVID-19, SARS, MERS, HCoV-OC43 и HKU1 являются бета-версиями. Два других коронавируса человека, HCoV-229E и HCoV-NL63, являются альфа.

Многие вирусы, поражающие людей, имеют в качестве генетического материала РНК. Он скопирован в ДНК наших клеток.

Анатомия COVID-19

Вирус - это не клетка, он даже не считается живым. Это нуклеиновая кислота (ДНК или РНК), покрытая оболочкой из белков, некоторые из которых связаны с сахарами (гликопротеинами).

Многие знакомые вирусные патогены - вызывающие простуду, грипп, геморрагические лихорадки, такие как Эбола, бешенство, денге и желтая лихорадка - представляют собой РНК-вирусы, печально известные своей быстрой мутацией и неспособными исправлять ошибки.

«Тело» COVID-19 - это, по сути, геном, покрытый гликопротеинами, с жирным мазком и короной из шипов, которые дали название «коронавирусу».

Геном представляет собой одну цепь РНК, которая называется «позитивно-смысловой». Это означает, что инфицированная клетка обрабатывает вирусный геном, как если бы это была собственная информационная РНК (мРНК), переводя ее в белки. РНК-вирус с «негативным смыслом» требует дополнительных манипуляций; фермент-хозяин должен создавать позитивную копию.

Геном коронавируса обычно составляет 26000-32000 оснований.Это много для вируса, но ничтожно по сравнению с человеческим геном. Например, наш ген BRCA1 имеет длину 125 951 основание. РНК коронавируса украшены «шапками» и «хвостами», как и у мРНК человека.

Попав в клетку человека, полдюжины или более вирусных мРНК отслаиваются. Первый, представляющий около двух третей вирусного генома, кодирует 16 белковых «инструментов», необходимых вирусам для репликации. Создание этого инструментария немного похоже на загрузку установщика для нового программного обеспечения.

Инструменты («неструктурные белки») - это ферменты, необходимые для производства других кодируемых белков, и факторы транскрипции для постоянного обновления инструкций РНК.

Другая треть вирусного генома кодирует четыре «структурных» белка, которые представляют собой орехи и блоты, из которых состоит вирус:

  • Спайк, или S-белок, образуется на ранней стадии заражения. Одна его часть, S1, захватывает молекулу рецептора, торчащую из клетки-хозяина, а другая часть сливается с клеточной мембраной.Три копии белка S образуют каждый спайк.
  • Мембранный (M) гликопротеин находится под шипами, где он формирует зрелые вирусные частицы и связывает внутренние слои.
  • Липид (жир) заимствован из мембран клетки-хозяина во время перенесенных инфекций.
  • Гликопротеины оболочки
  • (E) контролируют сборку, высвобождение и инфекционность зрелых вирусов.
  • Нуклеокапсидные (N) белки связывают характерную оболочку из идентичных субъединиц, подобную панелям теплицы, которая связывает и упаковывает геном РНК.Он также служит маскирующим устройством, скрывая вирусы от интерферонов нашей иммунной системы и вмешательства РНК.

Все коронавирусы имеют общие «инструменты», но отличаются несколькими дополнительными структурными белками, адаптированными к виду хозяина.

Шипы COVID-19 связываются с рецепторами ACE2

Вирусы эволюционировали вместе с нами, используя белки, которые выступают с поверхности наших клеток. ВИЧ и вирус Западного Нила проникают через рецепторы CCR5, которые усеивают белые кровяные тельца. Вирусы гриппа связывают остатки сиаловой кислоты.Вирус Коксаки и аденовирус нацелены на часть антитела. А простой герпес использует 3 разных дверных проема.

ACE2 повышает у нас кровяное давление, но является рецептором COVID-19.

COVID-19 фиксируется на ангиотензинпревращающем ферменте 2, также известном как ACE2.

Для нас ACE2 - это фермент, который влияет на кровяное давление.

Для COVID-19 ACE2 является рецептором, входом в дыхательные пути и альвеолы ​​(воздушные мешочки), а также в слизистую оболочку кровеносных сосудов. ACE2 также является рецептором для SARS-CoV и NL63-CoV.(БВРС-КоВ использует другой рецептор.)

Ключ к разработке вакцин и методов лечения - это трехмерные формы частей вируса, которые контактируют с нашими клетками.

SARS и NL63-CoV связываются со спиральной частью ACE2, которая выходит из клеточных мембран, образуя характерные туннели и мосты, которые представляют собой «горячую точку» для вирусов. Привлечение вируса к горячей точке рецепторов клеток похоже на то, как усталый пассажир, выходящий из метро и увидев вывеску Starbucks, движется к кафе, как будто его тащит луч трактора.Вирусная горячая точка, которая манит как SARS, так и COVID-19, является общей мишенью для лекарств и вакцин, поэтому вся работа по разработке вакцины против SARS сейчас находится в центре внимания.

Исследователи узнали из SARS, что части S1 вирусных шипов охватывают рецептор ACE2 в области из пяти аминокислот (строительных блоков белка). Несмотря на то, что четыре аминокислоты отличаются в COVID-19, они похожи по размеру и заряду на свои аналоги при SARS.

Если S1 прикрепляет SARS к рецептору ACE2, как пристыковку лодки, будет ли COVID-9 закрепляться точно в тех же точках?

Объединив традиционный подход к кристаллической структуре с вычислительными методами, Пей Хао из Китайской академии наук и его коллеги смоделировали интерфейс, показав, что COVID-19 действительно связывает ACE2 так же, как SARS, с немного меньшей силой.В письме к редактору журнала Science China Life Sciences они приходят к выводу, что новый вирус «представляет значительный риск для здоровья человека при передаче через путь связывания S-белок-ACE2».

Еще совсем недавно исследователи из Техасского университета в Остине и Национального института аллергии и инфекционных заболеваний использовали электронную микроскопию для определения триплета спайкового белка «до слияния», приближающегося к рецептору. Они представили один из трех шипов, вращающихся вверх, чтобы захватить рецептор, показывая, где именно должна помещаться вакцина.Работа опубликована в журнале Science .

Рыба, летучая мышь и человек идут на рынок морепродуктов…

Сравнение геномных последовательностей - классический способ разобраться в эволюционных взаимосвязях, а появление и исчезновение вирусов - это эволюция в действии. Эволюционные деревья, будь то миллионы лет назад до динозавров или всего несколько лет до вирусов, отображают происхождение от общих предков. Мем о шимпанзе, ведущих прямо к человеку, был и всегда был неверным.

Рыба-солдатик сосновая шишка Myripristis murdjan может передавать нам COVID-19 от летучих мышей.

COVID-19 и SARS-CoV имеют общего предка - коронавирус летучих мышей. Но COVID-19 на самом деле ближе к вирусу летучих мышей, разделяя 96% его геномной последовательности, по сравнению с примерно 86% с SARS-CoV. И еще больше мутит воду, ген шипа COVID-19 делит вставку из 39 оснований с типом рыбы-солдата, которая плавает в Южно-Китайском море.

Каким-то образом вирус, который превратился в COVID-19, мог появиться у летучей мыши в 2013 году и попасть в рыбу, которая оказалась на оптовом рынке морепродуктов Ухань Хуанань в эпицентре пандемии.

Путаница возникает из-за неразборчивости РНК-вирусов. На протяжении веков они обмениваются генетическим материалом, мутируют, теряют и приобретают части себя. В результате постоянно появляются лоскутные геномы, которые при некоторых обстоятельствах наносят вред хозяину. И наши тела все время этому помогают, чихая, сочясь, истекая кровью или избавляясь от бесчисленных вирусов, прежде чем либо истечет, либо выздоровеет.

COVID-19 пришел от нас?

Как вирус оказывается у двери клетки-хозяина? Гипотеза «ускользнувшего гена» ведет к классическому списку из трех объяснений появления вируса, такого как COVID-19:

  • Вирусы были древними промежуточными звеньями между коллекциями самовоспроизводящихся химикатов и первыми клетками.(Гипотеза первого вируса или первичного вирусного мира).
  • Вирусы когда-то были клетками, зараженными паразитами, которые лишили их способности производить собственные белки. Как вирусы, они инфицируют клетки, чтобы вырабатывать белки, необходимые для воспроизводства. (Гипотеза клеточной регрессии)
  • Вирусы
  • эволюционировали во многих организмах много раз как мобильные генетические элементы - так называемые «прыгающие гены», которые производили белковые покрытия и отбирали кусочки жировой мембраны у клеток. (Гипотеза ускользнувшего гена).

Все три могли случиться.

Так что же такое COVID-19? Намек на то, что обычно связывает рецептор?

Возможно, когда-то в прошлом вирус сформировал или стал включать в себя инструкции ДНК или РНК человека для создания интегрина, который представляет собой белок, связывающийся с ACE2. Интегрины склеивают наши клетки с окружающей соединительной тканью. Вирусный спайк маскируется под интегрин, захватывая наши клетки.

Другими словами, вирусная эпидемия может возникнуть как своего рода случайность биохимии и эволюции.

Вакцина!

Коронавирусы SARS (желтый)

Белок Spike занял центральное место в качестве кандидата на вакцину в начале вспышки SARS, потому что он вызывает реакцию антител у мышей. Различные стратегии вакцинации - живой ослабленный SARS, сцепление генов-шипов с существующими вакцинами, круги ДНК, содержащие гены-шипы и триплеты белков-шипов в наночастицах, - не работали достаточно хорошо. Но со времен атипичной пневмонии произошел взрыв геномных технологий, которые с удивительной быстротой привели к открытиям.

В исчерпывающем исследовании, опубликованном в bioRxiv, Аруначалам Рамайя из Калифорнийского университета, Ирвин и Вайтилингараджа Арумугасвами из Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе каталогизировали, где ключевые части четырех структурных белков COVID-19 связываются с белками, которые маркируют поверхности клеток иммунной системы.В работе был задействован спайковый белок, но с точки зрения иммунного ответа, а не рецептора.

Теперь фармацевтические и биотехнологические компании стремятся создать вакцины в партнерстве с BARDA, Управлением передовых биомедицинских исследований и разработок. BARDA была создана в 2011 году в рамках отдела здравоохранения и социальных служб, «чтобы помочь защитить нашу страну от химических, биологических, радиологических и ядерных угроз, а также от пандемического гриппа и возникающих инфекционных заболеваний» путем ускорения траектории диагностических, вакцин, и разработка лечения.

Но разработка вакцин и лекарств требует времени. До тех пор лечение остается поддерживающим. Тем временем эпидемиологи заполняют знаменатели этого случая: статистику летальности, чтобы точно определить, насколько смертоносна инфекция, и оценить, распространяют ли ее бессимптомные люди невольно.

Я закончу отрезвляющей мыслью с точки зрения патогена. Даже если мы победим COVID-19, продолжающийся, если не нарастающий, идеальный шторм событий предвещает другие вирусные эпидемии: изменение климата, путешествия людей и наше вторжение на территорию других животных.

Потенциально вызывающий беспокойство всплеск дексаметазона не по прямому назначению

Дексаметазон, мощный стероидный препарат, упоминается в новостях как возможное средство для лечения людей с Covid-19.

В пресс-релизе от июня 2020 года для британского клинического исследования RECOVERY было объявлено, что дексаметазон снижает риск смерти у госпитализированных пациентов с Covid-19, которым требовалась искусственная вентиляция легких или дополнительный кислород. В следующем месяце результаты исследования были опубликованы в Медицинском журнале Новой Англии.

Внимание общественности возросло еще больше в начале октября, когда президенту Дональду Трампу дали дексаметазон после того, как его поместили в Медицинский центр Уолтера Рида по поводу Covid-19. Предположительно, ему дали стероид в связи с тяжелым заболеванием.

объявление

Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов не одобрило дексаметазон для лечения пациентов с Covid-19 в больнице или дома. Кроме того, рекомендации по лечению Covid-19 от Национальных институтов здравоохранения специально рекомендуют использование дексаметазона против у пациентов, которые не нуждаются в кислороде, поскольку исследование RECOVERY не показало, что это принесло пользу этим пациентам и потенциально показало доказательства вреда.

Несмотря на это, некоторые врачи могут прописывать дексаметазон «не по назначению» не госпитализированным пациентам с Covid-19 так же, как врачи прописывают другие недоказанные методы лечения Covid-19, такие как гидроксихлорохин и азитромицин. Чтобы изучить эту возможность, мы изучили национальные данные о рецептах на пероральный дексаметазон, которые отпускались в аптеках по всей территории США в период с октября 2017 года по сентябрь 2020 года. Эти данные, собранные IQVIA, считаются золотым стандартом данных о отпуске по рецептам в США.С.

объявление

До апреля 2020 года количество выписанных рецептов на пероральный дексаметазон составляло в среднем чуть менее 260 000 в месяц. В апреле 2020 года это число упало примерно до 180 000 - вероятно, из-за того, что меньше людей обращалось за медицинской помощью из-за опасений заразиться Covid-19 - и выросло до 237 000 в июне 2020 года.

В июле количество рецептов выросло до 335 000, а затем несколько снизилось в августе и сентябре. За эти три месяца общее количество выписанных рецептов на дексаметазон было почти на 175000 больше (22.7%) по сравнению с количеством рецептов, выписанных за тот же трехмесячный период в 2019 году.

Ежемесячно отпускаемые рецепты на пероральный дексаметазон с октября 2017 года по сентябрь 2020 года. Данные включают рецепты, выписанные в 92% розничных аптек США и 70% аптек с доставкой по почте и аптек длительного ухода. Источник: Национальный аудит рецептов IQVIA

Лицами, выписавшими рецепты на дексаметазон за эти два периода времени, были терапевты (на 51 900 рецептов, или 46.8%), практикующих медсестер (на 38 300 рецептов, или 28,3%) и врачей семейной медицины (на 35 000 рецептов, или на 39,8%).

Увеличение количества рецептов между двумя периодами времени произошло только у взрослых в возрасте 20 лет и старше, для которых выписанные рецепты на дексаметазон увеличились на 33,0%. Среди лиц в возрасте от 0 до 19 лет количество рецептов на уменьшилось на на 37,3%.

Чтобы увидеть, было ли увеличение количества отпускаемых по рецептам дексаметазона в период с июля по сентябрь 2020 года вызвано повышенным спросом на пероральные стероиды в целом, мы также изучили выписанные рецепты на другие пероральные стероиды, такие как преднизон, который часто назначают при таких состояниях, как приступы астмы или отравление. плющ.Как и в случае с дексаметазоном, ежемесячное количество выписанных рецептов на другие стероиды резко упало в период с марта по апрель 2020 года с 6,2 миллиона до 4,0 миллиона, опять же, вероятно, из-за того, что меньше людей обращались за медицинской помощью. Но в отличие от перорального дексаметазона, количество выписанных рецептов на другие стероиды выросло до 4,5–4,6 миллиона в период с июля по сентябрь, что намного ниже предпандемического базового уровня.

Ежемесячно отпускаемые рецепты на пероральные стероиды, кроме дексаметазона (включая бетаметазон, кортизон, дефлазакорт, флудрокортизон, гидрокортизон, метилпреднизолон, преднизолон и преднизон) с октября 2017 года по сентябрь 2020 года.Данные включают рецепты, выписанные в 92% розничных аптек США и в 70% аптек с доставкой по почте и в аптеках длительного ухода. Источник: Национальный аудит рецептов IQVIA.

Рост числа выписанных рецептов на дексаметазон, начавшийся летом 2020 года, совпал с публикацией результатов исследования RECOVERY, имевшего место только у взрослых, и был вызван врачами, выписывающими рецепты, которые обычно работают в клиниках и других медицинских учреждениях. в больничных условиях и в целом не отражали повышенного спроса на пероральные стероиды.

В совокупности эти данные свидетельствуют о том, что врачи все чаще назначают дексаметазон не по назначению госпитализированным пациентам с Covid-19.

Трудно предсказать, будет ли продолжаться увеличенное количество назначений дексаметазона, хотя мы подозреваем, что его введение президенту Трампу во время его госпитализации повысило осведомленность общественности о потенциале препарата для лечения Covid-19. Это может привести к тому, что пациенты с Covid-19 будут запрашивать это лекарство, что приведет к усилению давления на врачей.

Мы поднимаем этот вопрос, потому что нет доказательств того, что дексаметазон полезен пациентам с Covid-19, которые не находятся в тяжелом состоянии, и потому что он имеет известные побочные эффекты, такие как депрессия, перепады настроения и психоз. Мы считаем, что до тех пор, пока не будут получены доказательства эффективности и безопасности, врачам преждевременно назначать дексаметазон пациентам с Covid-19, которые не находятся в тяжелом состоянии.

Мы также поднимаем этот вопрос, чтобы подчеркнуть наши более широкие опасения по поводу назначения не по назначению непроверенных препаратов для лечения Covid-19.В марте 2020 года значительно увеличилось количество рецептов на гидроксихлорохин для лечения Covid-19. Это произошло, несмотря на отсутствие доказательств того, что это лекарство было эффективным против болезни, и несмотря на знания о том, что гидроксихлорохин увеличивает риск опасных нерегулярных сердечных ритмов у других групп пациентов. Последующие клинические испытания показали, что гидроксихлорохин не приносит пользы пациентам с Covid-19.

Использование рецептурных препаратов не по назначению также может дорого обходиться страховщикам и пациентам.И дексаметазон, и гидроксихлорохин являются недорогими непатентованными лекарствами, поэтому их широкое применение не по назначению не повлечет за собой больших затрат. Тем не менее, многие потенциальные препараты от Covid-19, которые могут быть прописаны не по назначению, являются дорогостоящими фирменными препаратами.

В будущем появятся много потенциально многообещающих, но еще не проверенных лекарств от Covid-19. Мы понимаем, почему у врачей может возникнуть соблазн прописать эти препараты не по назначению. Трудно не вмешаться, столкнувшись с такой опасной болезнью, как Covid-19. Однако эта трудность не оправдывает назначения непроверенных лекарств, которые легко могут принести больше вреда, чем пользы.

Као-Пинг Чуа - педиатр первичного звена и доцент кафедры педиатрии Медицинской школы Мичиганского университета и департамента управления и политики здравоохранения Школы общественного здравоохранения Мичиганского университета. Адам С. Цифу - терапевт и профессор медицины Чикагского университета. Рена М. Конти - доцент кафедры рынков, государственной политики и права Школы бизнеса Questrom Бостонского университета и заместитель директора по исследованиям в области биофармацевтики и государственной политики Института инноваций и политики в области здравоохранения Бостонского университета.Доступ к данным о рецептах был предоставлен через совместную программу исследований человеческих данных Института IQVIA, целью которой является содействие исследованиям воздействия пандемии Covid-19 на систему здравоохранения США. Компания IQVIA никак не участвовала в анализе.

Расщепление и активация шипового белка коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома трипсиноподобной протеазой дыхательных путей человека

РЕФЕРАТ

Высокопатогенный коронавирус тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV) представляет постоянную угрозу для здоровья человека.Белок вирусных шипов (SARS-S) опосредует проникновение в клетки-хозяева и является потенциальной мишенью для противовирусного вмешательства. Активация SARS-S протеазами клетки-хозяина важна для инфекционности SARS-CoV, но остается не совсем понятной. Здесь мы проанализировали роль трансмембранных сериновых протеаз типа II (TTSP), трипсиноподобной протеазы (HAT) дыхательных путей человека и трансмембранной протеазы серина 2 (TMPRSS2) в активации SARS-S. Мы обнаружили, что HAT активирует SARS-S в контексте суррогатных систем и подлинной инфекции SARS-CoV и коэкспрессируется с вирусным рецептором ангиотензинпревращающего фермента 2 (ACE2) в эпителиальных клетках бронхов и пневмоцитах.HAT расщепил SARS-S по R667, как определено мутагенезом и масс-спектрометрией, и активировал SARS-S для слияния клеток с цис и транс , в то время как родственная легочная протеаза TMPRSS2 расщепила SARS-S на нескольких сайтах и ​​активировала SARS-S только в транс . Однако экспрессия TMPRSS2, но не HAT, делает слияние вируса с клеткой, вызванное SARS-S, независимым от активности катепсина, что указывает на то, что HAT и TMPRSS2 активируют SARS-S по-разному. В совокупности наши результаты показывают, что HAT расщепляет и активирует SARS-S и может способствовать распространению вируса у пациентов.

ВВЕДЕНИЕ

Коронавирус тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV) является возбудителем нового заболевания легких, SARS, которое впервые было обнаружено в провинции Гуандун на юге Китая в 2002 году (32, 33). Впоследствии атипичная пневмония распространилась более чем на 30 стран с 8 096 случаями. Около 10% заболевших умерли от болезни, при этом пациенты пожилого возраста пострадали в большей степени (32, 33). Возникновение SARS-CoV было связано с пальмовыми циветтами и другими животными, продаваемыми на китайских влажных рынках (15).Считается, что эти животные служат промежуточными хозяевами, в то время как китайские подковоносы, являющиеся носителями вирусов, связанных с SARS-CoV, представляют собой естественный резервуар (27, 29). Циркуляция SARS-CoV в резервуаре для животных представляет собой постоянную угрозу повторного внедрения вируса в человеческую популяцию. Следовательно, требуется разработка профилактических и терапевтических мер, а факторы клетки-хозяина, необходимые для распространения SARS-CoV и, возможно, других респираторных вирусов, являются привлекательными мишенями.

Спайковый белок SARS-CoV (SARS-S) вместе с вирусными белками M и E встраивается в вирусную мембрану, а SARS-S опосредует проникновение инфекционного вируса в клетки-мишени (20). Для этого SARS-S должен связываться с рецептором на поверхности клетки-хозяина и сливать вирусную мембрану с мембраной клетки-хозяина, тем самым обеспечивая доставку белков SARS-CoV и геномной информации в цитоплазму клетки-хозяина, где находится SARS. -CoV репликация (20, 43). Было установлено, что ангиотензинпревращающий фермент 2 (ACE2) является рецептором SARS-CoV (28) и экспрессируется на пневмоцитах и ​​энтероцитах типа II, основных вирусных клетках-мишенях (16, 31, 46, 47).Экспрессия ACE2 защищает от экспериментально вызванного заболевания легких, а вирусное вмешательство в экспрессию рецептора может способствовать патогенезу SARS (22, 25).

Взаимодействие с рецептором и слияние мембран осуществляются двумя отдельными субъединицами в SARS-S, N-концевой поверхностной единицей S1 (связывание рецептора) и C-концевой трансмембранной единицей S2 (слияние мембран). Чтобы перейти в активное состояние, вирусные гликопротеины с архитектурой, подобной архитектуре SARS-S, называемые слитыми белками класса I, часто зависят от расщепления протеазами клетки-хозяина (20).Первоначальное исследование действительно показало, что эффективное распространение SARS-CoV может зависеть от активации SARS-S фурином (3), но эти результаты не были подтверждены последующей работой. Основополагающее исследование Симмонса и его коллег показало, что катепсины, рН-зависимые, эндо- / лизосомальные цистеиновые протеазы, активируют SARS-S (40). Таким образом, считается, что связывание SARS-CoV с ACE2 запускает рецептор-опосредованный эндоцитоз и транспорт вирионов в эндосомы клетки-хозяина (48), где SARS-S активируется для слияния мембран при расщеплении катепсином L (40).Следовательно, было предложено разработать ингибиторы катепсина для терапии инфекции SARS-CoV (40), и такие усилия предпринимаются (36).

Трансмембранные сериновые протеазы типа II (TTSP) играют важную роль в развитии и гомеостазе, а дисрегулируемая экспрессия TTSP является признаком различных видов рака (10). Вирусы гриппа человека паразитируют на трансмембранной протеазе серин 2 (TMPRSS2) и трипсиноподобной протеазе дыхательных путей человека (HAT), входящих в семейство TTSP, для облегчения их активации (5, 7, 9).Также недавно было показано, что TMPSS2 расщепляет и активирует SARS-S для слияния клетка-клетка и вирус-клетка, тем самым обеспечивая доступ к катепсин-независимым клеткам-хозяевам (14, 30, 38). В настоящее время неизвестно, играет ли HAT роль в активации SARS-S.

Здесь мы сообщаем, что HAT расщепляет SARS-S в положении R667 и активирует SARS-S для слияния клеток с клетками, в то время как TMPRSS2 имеет несколько сайтов расщепления в SARS-S и активирует SARS-S для слияния клеток и вирусов. . Было обнаружено, что HAT коэкспрессируется с ACE2 в эпителии легких человека, что указывает на то, что эта протеаза может способствовать распространению вируса у пациентов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Плазмиды. Экспрессионные плазмиды pCAGGS-SARS-S, кодирующие спайковый белок франкфуртского штамма SARS-CoV, и pcDNA3-hACE2, кодирующий человеческий ACE2 (hACE2), были описаны ранее (18, 19 ). Плазмиды, кодирующие человеческие TMPRSS2, TMPRSS3, TMPRSS4, TMPRSS6 и гепсин, также были описаны ранее (9, 24, 35, 37). HAT амплифицировали с помощью ПЦР из кДНК из бронха человека с использованием праймеров p5_EcoRI_HAT (GCGAATTCACCATGTATAGGCCAGCACGTGTAACTTCG) и p3_NheI_HAT (GCGCTAGCGCCTAGATCCCAGTTTGTTGCCTAATCC).Продукт ПЦР вставляли в pCAGGS через EcoRI и NheI и контролировали секвенированием.

Клеточная культура

. Клетки 293T размножали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), пенициллина и стрептомицина, и выращивали в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO 2 . Клетки 293T, стабильно экспрессирующие ACE2, 293T-hACE2, были получены путем трансфекции плазмиды pcDNA3.1zeo-hACE2 (18) в клетки 293T с последующим отбором устойчивых клеток с зеоцином (Invitrogen) в концентрации 50 мкг / мл, как сообщалось ранее (13). ).Гомогенная поверхностная экспрессия ACE2 на стабильно трансфицированных клетках была подтверждена проточной цитометрией.

Расщепление клеточного SARS-S с помощью HAT. Для обнаружения расщепления SARS-S с помощью HAT и других TTSP клетки 293T котрансфицировали плазмидой экспрессии SARS-S вместе с плазмидой экспрессии TTSP или пустой плазмидой. Через 6-8 часов после трансфекции среду меняли, а через 48 часов после трансфекции клетки промывали один раз 1-кратным фосфатно-солевым буфером (PBS) и лизировали 2-кратным загрузочным буфером додецилсульфата натрия (SDS).Для иммуноблоттинга лизаты разделяли электрофорезом в SDS-геле и переносили на нитроцеллюлозные мембраны. Белок SARS-S был обнаружен путем окрашивания кроличьей сывороткой, специфичной для субъединицы S1, полученной путем иммунизации пептидом, содержащим аминокислоты SARS-S от 19 до 48 (17). Для контроля загрузки очищенные мембраны инкубировали с антителом против β-актина (Sigma).

VLP. Для получения вирусоподобных частиц (VLP) клетки 293T котрансфицировали плазмидой p96ZM651gag-opt, кодирующей HIV-1 Gag (p55), плазмидой экспрессии SARS-S, плазмидой экспрессии TTSP или пустой вектор.Клеточные супернатанты собирали через 48 часов после трансфекции и концентрировали ультрафильтрацией с использованием центробежных концентраторов VivaSpin (Sartorius). Затем VLP очищали от концентрированных супернатантов ультрацентрифугированием через подушку из 20% сахарозы в течение 2 часов при 25000 об / мин и 4 ° C. Наконец, супернатанты и осадок реакций ультрацентрифугирования обрабатывали PBS или трипсином с последующим добавлением ингибитора трипсина сои (Sigma) и анализом вестерн-блоттингом с использованием коммерчески доступных антител, направленных против субъединицы S2 SARS-S (Imgenex).Кроме того, присутствие Gag ВИЧ в осадках и супернатантах выявляли с использованием супернатанта гибридомы 183-h22-5C против p24.

HAT-зависимая активация SARS-S для слияния клеток с клетками. Анализ слияния клеток с клетками проводили, как описано ранее (14, 21, 39). Для анализа слияния клетки-клетки, управляемого SARS-S, в отсутствие TTSP, эффекторные клетки 293T, высеянные в 6-луночные планшеты при 1,2 × 10 5 / лунку, были трансфицированы CaPO 4 либо плазмидой экспрессии SARS-S, либо пустая плазмида (отрицательный контроль) в сочетании с плазмидой pGAL4-VP16, которая кодирует активатор транс- вируса простого герпеса VP16 , слитый с ДНК-связывающим доменом фактора транскрипции Saccharomyces cerevisiae GAL4 (21).Параллельно клетки-мишени 293T высевали в 48-луночные планшеты при 0,8 × 10 5 / лунку и трансфицировали либо плазмидой, кодирующей hACE2, либо пустым вектором (отрицательный контроль) вместе с плазмидой pGal5-luc, которая кодирует репортерный ген люциферазы. под контролем промотора, содержащего пять сайтов связывания GAL4. Для анализа активации SARS-S с помощью HAT и других TTSP в cis анализ слияния проводили, как описано выше, но эффекторные клетки дополнительно трансфицировали плазмидой экспрессии TTSP.Чтобы определить активацию SARS-S с помощью HAT и других TTSP в trans , анализ слияния проводили, как описано выше, но клетки-мишени дополнительно трансфицировали плазмидой экспрессии TTSP. Через 24 часа после трансфекции эффекторные клетки отделяли пипетированием, ресуспендировали в свежей среде и добавляли к клеткам-мишеням. Через 6 часов после культивирования к образцам добавляли среду с добавлением трипсина (конечная концентрация 100 нг / мл; Sigma) или PBS. Через 16 ч после обработки трипсином среду полностью удаляли и добавляли свежую культуральную среду без трипсина.Наконец, через 24 часа после смены среды слияние клетки с клеткой было количественно определено путем определения активности люциферазы в клеточных лизатах с использованием коммерчески доступного набора (Promega).

Активация лентивирусных псевдотипов, несущих SARS-S, с помощью HAT. Лентивирусные псевдотипы, несущие SARS-S, были в основном созданы, как описано ранее (14, 21, 39, 41). Вкратце, клетки 293T временно котрансфицировали pNL4-3 E-R-Luc (11), плазмидой экспрессии SARS-S и либо плазмидой экспрессии TTSP, либо пустой плазмидой.Через 16 часов после трансфекции культуральную среду заменяли свежей средой, а через 48 часов после трансфекции собирали культуральные супернатанты. Супернатанты пропускали через фильтры с размером пор 0,45 мкм, разделяли на аликвоты и хранили при -80 ° C. Чтобы проанализировать активацию цис слияния вирус-клетка, в экспериментах по заражению использовали псевдотипы, полученные в TTSP-экспрессирующих клетках. В частности, для инфицирования клеток 293T-hACE2, предварительно обработанных в течение 30 мин при 37 ° C указанными концентрациями хлорида аммония или ингибитора катепсина MDL28170 (Calbiochem), использовали равные объемы псевдотипов, нормализованных по сопоставимой инфекционности для клеток 293T-hACE2.Через 16 часов после инфицирования инфекционную среду заменяли свежей культуральной средой без ингибитора, а через 72 часа после инфицирования определяли активность люциферазы в клеточных лизатах, используя коммерчески доступный набор (Promega). Для оценки активации слияния вирус-клетка транс анализ проводили, как описано для настройки цис , за исключением того, что псевдотипы, полученные в отсутствие экспрессии TTSP, использовали для инфицирования клеток-мишеней 293T-hACE2, трансфицированных в экспресс TTSP.

HAT-зависимое образование синцития. 293T-hACE2 клетки (2 × 10 5 клеток на мл) высевали на покровные стекла в 24 лунки и трансфицировали 1 мкг экспрессионных плазмид HAT, TMPRSS2 или TMPRSS4 или трансфицировали пустым контролем. плазмиду (pCAGGS) с использованием реагента X-tremeGENE (Roche) в соответствии с инструкциями руководства. Через 24 часа клетки инфицировали SARS-CoV (Франкфурт-1; множественность заражения 0,1) в течение 30 минут при 4 ° C, и предметные стекла фиксировали параформальдегидом (8%) еще через 24 часа.Клетки были проницаемы с помощью 0,1% Triton X-100, и антиген SARS-CoV был обнаружен с помощью иммуноокрашивания путем нанесения антисыворотки к пациенту с SARS, разведенной 1: 100. Параллельно протеазы были обнаружены с помощью мышиных антител против HAT (R&D Systems), мышиных антител против TMPRSS2 (Santa Cruz) или мышиных антител против Myc (для TMPRSS4, меченного Myc; Life Technologies), все в разведении 1: 100, и ядра были окрашен 4 ', 6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI). Вторичную детекцию проводили с помощью Cy3-конъюгированных козьих антител против человека (1: 200) и меченных Cy2 козьих антител против мыши (1: 200) (Dianova).Все снимки сделаны с помощью флуоресцентного микроскопа Axio Imager.M1 (Zeiss).

Дайджест рекомбинантного SARS-S с помощью рекомбинантной HAT. Восемь микрограммов рекомбинантного SARS-S (rSARS-S [Beijing 02]), продуцированного в клетках 293T и полученного из коммерческого источника (Geneimmune), инкубировали с 200 нг HAT ( R&D Systems) в буфере для анализа, 50 мМ Трис, 0,05% (вес / объем) Brij 35, pH 9,5, в течение 2 ч при 37 ° C в общем объеме 25 мкл. Впоследствии реакции останавливали добавлением буфера для загрузки SDS, и продукты реакции анализировали с помощью 12.5% SDS-PAGE и вестерн-блоттинг. Альтернативно, продукты реакции разделяли на градиентных гелях NuPAGE и анализировали масс-спектрометрией (МС), как описано ниже.

Масс-спектрометрический анализ продуктов расщепления SARS-S. Продукты расщепления SARS-S разделяли на предварительно подготовленных гелях NuPAGE бис-трис с градиентом от 4 до 12% с использованием буферной системы морфолинпропансульфоновой кислоты в соответствии с инструкциями производителя (Invitrogen). После окрашивания коллоидным кумасси гелевые пробки вырезали и подвергали триптическому перевариванию в геле с использованием нашей автоматизированной платформы для идентификации белков, разделенных гелем, с помощью матричной лазерной десорбционной ионизации - время пролета (MALDI-TOF) MS и поиска в базе данных Mascot (23).Остальные полосы подвергали ручному гидролизу в геле с помощью эндопротеиназы Asp-N (Roche) для секвенирования в стандартных условиях (включая предварительное восстановление и карбоксамидометилирование остатков Cys). Экстрагированные пептиды сушили, повторно растворяли в 0,5% трифторуксусной кислоте и 0,1% октил-глюкопиранозиде и готовили для MALDI MS с помощью тонкослойного аффинного препарата на матрице альфа-циано-4-гидроксикоричной кислоты (23). Обзор пептидов и масс-спектры фрагментных ионов получали на масс-спектрометре Ultraflex MALDI-TOF / TOF (Bruker Daltonics).

Иммуноокрашивание срезов тканей. Фиксированная формалином парафиновая ткань легкого была получена при полном этическом одобрении Национальной службы исследований и этики (Оксфордширский комитет по исследованиям и этике A, ссылка 04 / Q1604 / 21) и иммуноокрашена на HAT и ACE2. Извлечение антигена осуществляли варкой под давлением в различных растворах для извлечения антигена. Слайды помещали в монтажную среду Aquatex (Merck, Великобритания). Иммуноокрашивание ACE2 (аффинно очищенная козья поликлональная сыворотка; R&D Systems, Abingdon, United Kingdom) было выполнено, и ACE2 был обнаружен с использованием мышиных антител козьего Ig (GTI-75) (16) и системы обнаружения полимеров Novolink max (Leica Microsystems). , Newcastle, United Kingdom), в соответствии с инструкциями производителя, после извлечения антигена в цитрате, pH 6.0. Иммуноокрашивание HAT (мышиное моноклональное антитело 337029; R&D Systems, Абингдон, Соединенное Королевство) выполняли с использованием системы обнаружения полимеров Novolink max после извлечения антигена в поисковом растворе Dako Target, pH 6,0 (Dako, Кембридж, Соединенное Королевство). Альвеолярные макрофаги в легочной ткани использовали в качестве внутреннего положительного контроля для иммуноокрашивания ACE2 (45), а ткань бронхов использовали в качестве положительного контроля для иммуноокрашивания HAT (44). В качестве отрицательного контроля для иммуноокрашивания нормальная поликлональная козья сыворотка была заменена первичным антителом против ACE2, а нерелевантное мышиное моноклональное антитело (антитело против ALK1, клон ALK1 [34]) было заменено первичным антителом против HAT.Окрашенные срезы фотографировали с помощью камеры Nikon DS-FI1 с блоком управления Nikon DS-L2 (Nikon United Kingdom Limited, Кингстон-апон-Темз, Великобритания) и микроскопом Olympus BX40 (Olympus United Kingdom Limited, Уотфорд, Великобритания). .

РЕЗУЛЬТАТЫ

HAT расщепляет SARS-S. Сначала мы исследовали, расщепляет ли HAT SARS-S. Для этого протеаза и S-белок коэкспрессировали в клетках 293T, и клеточные лизаты анализировали вестерн-блоттингом на продукты расщепления.В качестве положительного контроля расщепления SARS-S лизаты клеток, трансфицированных одним SARS-S, обрабатывали трипсином, который расщепляет SARS-S на границе между субъединицами S1 и S2 (2, 39). В отсутствие коэкспрессии TTSP и обработки клеточных лизатов трипсином был обнаружен только полноразмерный SARS-S (180 кДа) (рис. 1 A). Расщепление трипсином привело к образованию субъединицы S1 (120 кДа). Совместная экспрессия TMPRSS2 приводила к расщеплению SARS-S на нескольких сайтах, как и ожидалось (14), в то время как коэкспрессия HAT приводила к паттерну расщепления, неотличимому от паттерна, наблюдаемого при обработке трипсином (рис.1А). Таким образом, SARS-S является субстратом для HAT, а трипсин и HAT расщепляют SARS-S на аналогичных или идентичных сайтах.

Рис. 1.

HAT рассекает SARS-S. (A) Расщепление SARS-S с помощью HAT в котрансфицированных клетках 293T. Плазмиды экспрессии, кодирующие SARS-S и указанные протеазы или пустой вектор (pcDNA), временно котрансфицировали в клетки 293T, которые затем обрабатывали трипсином или PBS. Впоследствии расщепление S-белка было обнаружено с помощью вестерн-блоттинга клеточных лизатов с использованием сыворотки, специфичной для субъединицы S1 SARS-S.Обнаружение β-актина служило контролем нагрузки. S Fl , полнометражный SARS-S; Субъединица S1, S1 SARS-S; звездочки - фрагменты расщепления SARS-S, генерируемые TMPRSS2. (B) HAT расщепляет SARS-S по аргинину 667. Плазмиды, кодирующие SARS-S дикого типа или мутацию SARS-S R667A, трансфицировали в клетки 293T вместе с TMPRSS2, плазмидами экспрессии HAT или пустым вектором (pcDNA). Затем клетки обрабатывали PBS или трипсином, и расщепление SARS-S анализировали с помощью вестерн-блоттинга клеточных лизатов с использованием S1-специфической антисыворотки.Экспрессию β-актина в клеточных лизатах оценивали как контроль нагрузки. (C) Расщепление рекомбинантного SARS-S (rSARS-S) рекомбинантной HAT. Рекомбинантный SARS-S инкубировали с указанными концентрациями рекомбинантного HAT, и продукты расщепления анализировали вестерн-блоттингом с использованием сыворотки, специфичной для SARS-S1. Также была обнаружена рекомбинантная HAT. (D) Разделение продуктов расщепления SARS-S для масс-спектрометрического анализа. Продукты расщепления SARS-S разделяли гель-электрофорезом и визуализировали коллоидным окрашиванием Кумасси.Основные дифференциальные полосы, появляющиеся после обработки HAT (см. Аннотации очевидных молекулярных масс справа), подвергали гидролизу в геле трипсином или Asp-N с последующим масс-спектрометрическим анализом. Таким образом, мы идентифицировали полосу 130 кДа как S2 с ее N-концом, начинающимся с S668, и полосу 95 кДа как S1 с ее концом C, заканчивающимся на R667. Необработанный SARS-S (полоса 170 кДа в левой полосе) обрабатывали параллельно в качестве контроля.

HAT расщепляет SARS-S по аргинину 667. Трипсин и HAT генерируют неразличимые фрагменты расщепления SARS-S, а сайт расщепления трипсина ранее был сопоставлен с аргинином 667 (2, 39).Поэтому мы исследовали, является ли эта аминокислота также мишенью для протеолиза SARS-S с помощью HAT. В то время как совместная экспрессия SARS-S дикого типа и HAT в клетках 293T или обработка трипсином клеток, экспрессирующих SARS-S дикого типа, приводила к сравнимому расщеплению SARS-S, расщепление мутанта SARS-S с мутацией R667A трипсином не проводилось или наблюдалась HAT (рис. 1B). Напротив, мутация R667A мало повлияла на обработку SARS-S с помощью TMPRSS2 (рис. 1B). Эти результаты показывают, что R667 необходим для протеолиза SARS-S трипсином и HAT, но не TMPRSS2.

Затем мы попытались предоставить прямое доказательство того, что HAT действительно расщепляет SARS-S на уровне R667. С этой целью мы переваривали растворимый SARS-S с помощью рекомбинантной HAT и анализировали продукты расщепления с помощью гель-электрофореза и масс-спектрометрии. Переваривание SARS-S с помощью HAT генерировало субъединицу S1 в зависимости от концентрации (рис. 1C), что указывает на то, что использованные рекомбинантные белки адекватно моделируют процессинг SARS-S с помощью HAT в клетках. Затем мы повторили расщепление и визуализировали фрагменты расщепления с помощью гель-электрофореза с последующим окрашиванием кумасси коллоидом.Как и ожидалось, две заметные полосы (∼130 кДа, ∼95 кДа), потенциально соответствующие субъединицам S1 и S2, были обнаружены при инкубации SARS-S с HAT и отсутствовали в реакциях, проводимых в отсутствие HAT (рис. 1D). ). Эти полосы вместе с полосами, наиболее вероятно представляющими интактный SARS-S (~ 170 кДа) и рекомбинантный HAT (~ 25 кДа), были подвергнуты триптическому гидролизу в геле и масс-спектрометрической идентификации белков. При поиске в базе данных Swiss-Prot все четыре проанализированные полосы были идентифицированы как спайковые гликопротеины (регистрационный номер базы данных Swiss-Prot P59594).Однако более тщательное изучение охвата последовательностей (т. Е. Распределения обнаруженных триптических пептидов) показало, что полоса 170 кДа представляет собой полноразмерный SARS-S, тогда как полосы 130 и 95 кДа соответствуют S2 и S1, соответственно. Более медленная миграция фрагмента S2 по сравнению с фрагментом S1, что было подтверждено вестерн-блоттингом (данные не показаны), может быть связано с его более обширным гликозилированием и / или конкретными используемыми условиями гель-электрофореза. В полосе 25 кДа был обнаружен C-концевой фрагмент SARS-S (совпадающие аминокислоты от 800 до 1000) и HAT (идентифицированный как серин 11D трансмембранной протеазы, номер доступа в базе данных Swiss-Prot O60235).Если HAT действительно расщепляет SARS-S на C-конце R667, расщепление субъединицы S2 эндопротеиназой Asp-N (которая расщепляет N-конец Asp) должно давать пептид 668-STSQKSIVAYTMSLGA-683 (M + H + , вычислено = 1,642,8. Da) как продукт отщепления от N-конца S2. Посредством гидролиза в геле с помощью Asp-N и масс-спектрометрии соответствующий масс-сигнал был обнаружен исключительно из полосы 130 кДа S2, но не из полос, соответствующих S1 и интактному SARS-S, и его идентичность была дополнительно подтверждена масс-спектрометрическим анализом. секвенирование (рис.2 А и В). Соответственно, мы обнаружили и секвенировали C-концевой Asp-N фрагмент S1 (649-DIPIGAGICASYHTVSLLR-667, M + H + , вычислено = 2042,1 Да с карбоксамидометилированным Cys) только из полосы S1 95 кДа (рис. 2B и D). Таким образом, наши данные масс-спектрометрии однозначно продемонстрировали, что HAT генерирует фрагмент расщепления SARS-S, совместимый только с расщеплением по R667, подтверждая результаты нашего мутагенного анализа.

Рис. 2.

Масс-спектрометрический анализ продуктов расщепления SARS-S, расщепленных Asp-N.(A и B) Увеличенные спектры обзора пептидов перевариваемых Asp-N. Сигналы масс при m / z 1,644.00 (A) и m / z 2043,29 (B) представляют N-концевой Asp-N фрагмент S2 (668-STSQKSIVAYTMSLGA-683, M + H + , вычислено = 1,643,83). Da) и C-концевой Asp-N-фрагмент S1 (649-DIPIGAGICASYHTVSLLR-667, M + H + вычислено = 2043,069 Да с карбоксамидометилированным Cys) соответственно, поскольку они были обнаружены исключительно в соответствующих фракциях.Обратите внимание, что сигнал массы при m / z 1,659,99 на панели A представляет окисленный Met вариант 668-STSQKSIVAYTMSLGA-683 (+16 единиц массы). (C и D) Масс-спектрометрическое секвенирование концевых фрагментов Asp-N. (C) Масс-спектр фрагментного иона m / z 1,644 четко подтвердил идентичность пептида как 668-STSQKSIVAYTMSLGA-683 посредством окончательной серии N-концевых b-ионов. Преобладающее присутствие ионов b-типа согласуется с локализацией заряда на Lys в положении 5, и только эта серия ионов аннотирована для ясности (P, предшественник).(D) Масс-спектр фрагментного иона m / z 2043 четко подтвердил идентичность пептида как 649-DIPIGAGICASYHTVSLLR-667 посредством окончательной серии С-концевых y-ионов. Преобладающее присутствие ионов y-типа согласуется с локализацией заряда на C-конце Arg, и только эта серия ионов аннотирована для ясности. Поиск в базе данных талисманов обоих масс-спектров фрагментных ионов в базе данных Swiss-Prot (с ферментом, установленным на Arg-C плюс Asp-N для имитации сценария расщепления) выявил спайковый гликопротеин (номер доступа в базе данных Swiss-Prot P59594) со значительным MS / MS ионные баллы.а.е., условные единицы.

SARS-S, расщепленный HAT, включается в вирусоподобные частицы. Коэкспрессия SARS-S и TMPRSS2 дает несколько фрагментов S-белка, самый большой из которых попадает в супернатанты культур (14). Поэтому мы затем исследовали, остались ли продукты расщепления SARS-S, генерируемые HAT, ассоциированными с частицами, или они попали в супернатанты культур. Для этого производные от белка Gag ВИЧ VLP, несущие белок SARS-S, были продуцированы в отсутствие или в присутствии HAT и TMPRSS2.Затем частицы осаждали через подушку из 20% сахарозы, и гранулы, а также супернатанты обрабатывали трипсином или PBS с последующим вестерн-блот-анализом на присутствие S-белка (фиг. 3). Было обнаружено, что частицы, полученные в присутствии TMPRSS2, содержат фрагменты SARS-S разного размера (осадок), включая полноразмерный спайковый белок 180 кДа. При коэкспрессии HAT полноразмерный SARS-S и его субъединица S2 (90 кДа) были обнаружены в осадке, аналогично продуктам расщепления, возникающим в результате обработки трипсином частиц, полученных в отсутствие TMPRSS2 или HAT (рис.3). Супернатанты препаратов частиц, полученные в TMPRSS2-экспрессирующих клетках, содержали субъединицу SARS-S размером 150 кДа, а также более мелкие продукты расщепления (рис. 3), что указывает на то, что эти фрагменты высвобождались в супернатанты культур. Напротив, SARS-S в значительной степени отсутствовал в супернатантах, продуцируемых контрольными или экспрессирующими HAT клетками. Таким образом, SARS-S, расщепленный HAT, сохраняет свою ассоциацию с частицами, в то время как значительная часть фрагментов SARS-S, генерируемых TMPRSS2, попадает в супернатанты культур.

Рис. 3.

Экспрессия HAT не вызывает выделение SARS-S. VLP продуцировались в клетках 293T путем коэкспрессии ВИЧ p55-Gag и SARS-S в отсутствие и в присутствии коэкспрессированного TMPRSS2, HAT или котрансфицированного пустого вектора. Супернатанты собирали и подвергали ультрафильтрации с последующим ультрацентрифугированием через подушку из 20% сахарозы. После этого осадок и супернатанты ультрацентрифужных реакций обрабатывали трипсином или PBS и анализировали на наличие белка S с использованием сыворотки, специфичной для субъединицы S2 SARS-S.Параллельно определяли наличие p55-Gag ВИЧ. Осадок UC, препарат VLP, подвергнутый ультрафильтрации с последующим ультрацентрифугированием и анализом осадка; UC-Sup, препарат VLP, подвергнутый ультрафильтрации с последующим ультрацентрифугированием и анализом супернатантов реакций ультрацентрифугирования; S Fl , полнометражный SARS-S; S2, субъединица S2 SARS-S; звездочки - фрагменты расщепления SARS-S, генерируемые TMPRSS2.

HAT активирует SARS-S в цис и транс для слияния клеток.Затем мы исследовали, активирует ли расщепление SARS-S HAT белок S для слияния клеток. Наши предыдущие исследования показали, что в клеточной системе 293T как экспрессия рецептора, так и протеолитическая активация ограничивают скорость слияния клетки-клетки, управляемого SARS-S (14, 39). Таким образом, опосредованное S-белком слияние с клетками 293T, которые экспрессируют небольшие количества эндогенного ACE2 (28), обнаруживается, но неэффективно и может быть устранено сверхэкспрессией ACE2 на клетках-мишенях (14, 39). В этих условиях слияние управляется еще не идентифицированной лейпептин-чувствительной протеазой, эндогенно экспрессируемой клетками 293T (39).В качестве альтернативы слияние может быть восстановлено путем экспрессии TMPRSS2 на клетках-мишенях или обработкой трипсином (14, 39), которые обеспечивают эффективную активацию SARS-S.

Используя этот анализ слияния клетки-клетки, мы сначала проверили, увеличивает ли совместная экспрессия HAT в эффекторных клетках, экспрессирующих S-белок, активность слияния клеток (активация цис ). Для этого эффекторные клетки трансфицировали плазмидой экспрессии SARS-S и плазмидой экспрессии TTSP или пустой плазмидой. Эффекторные клетки, трансфицированные только пустой плазмидой, служили отрицательными контролями.Клетки-мишени трансфицировали плазмидой экспрессии ACE2 или пустой плазмидой. Впоследствии эффекторные клетки и клетки-мишени смешивали и обрабатывали трипсином или PBS, и степень эффективности слияния клеток с клетками определяли через 48 часов после смешивания клеток. Присутствие SARS-S в эффекторных клетках было критическим для слияния клеток, как и ожидалось (рис. 4 A, pcDNA). В отсутствие экзогенной экспрессии ACE2 на клетках-мишенях и обработки трипсином или экспрессии TTSP не наблюдалось заметного слияния клетки-клетки, управляемого S-белком (pcDNA / SARS-S, белая полоса).Обработка трипсином преодолела низкий уровень экспрессии рецепторов на клетках-мишенях и привела к значительному увеличению фузогенной активности SARS-S (pcDNA / SARS-S, серая полоса), как и ожидалось (39) (рис. 4A). Точно так же сверхэкспрессия ACE2 усиливала слияние клеток, которое дополнительно усиливалось обработкой трипсином (pcDNA / SARS-S, линейная полоса и черная полоса, соответственно), что согласуется с нашими недавними открытиями (14, 39). Экспрессия TMPRSS2, TMPRSS3, TMPRSS4, TMPRSS6 и гепсина, TTSP, ранее исследованные на их способность активировать SARS-S (14) и гемагглютинин вируса гриппа (4), в эффекторных клетках, трансфицированных SARS-S, не оказали заметного влияния на слияние активность SARS-S (рис.4А). Напротив, HAT эффективно активировал SARS-S для слияния с клетками-мишенями, экспрессирующими эндогенный ACE2, что указывает на то, что расщепление SARS-S в цис с помощью HAT, но не TMPRSS2, активирует SARS-S для слияния клеток с клетками.

Рис. 4.

HAT активирует SARS-S для слияния клеток в цис и транс . (A) цис активация SARS-S с помощью HAT. Эффекторные клетки 293T котрансфицировали экспрессионной плазмидой pGAL4-VP16, плазмидой SARS-S и плазмидами, кодирующими указанные протеазы или пустую плазмиду (pcDNA), и смешивали с клетками-мишенями, котрансфицированными плазмидой экспрессии ACE2 или пустой плазмидой и плазмидой, кодирующей люциферазу под контролем. промотора с пятью сайтами связывания GAL4.Затем смеси клеток обрабатывали PBS или трипсином, и активность люциферазы в клеточных лизатах определяли количественно через 48 часов после смешивания клеток. Показаны результаты репрезентативного эксперимента, проведенного в трех экземплярах; планки погрешностей указывают на стандартные отклонения (SD). Подобные результаты наблюдались в независимом эксперименте. (B) транс активация SARS-S с помощью HAT. Анализ слияния клетки с клеткой выполняли, как описано в легенде к панели A, но протеазы экспрессировались в клетках-мишенях.Показаны результаты репрезентативного эксперимента, проведенного в трех экземплярах, которые были подтверждены в двух отдельных экспериментах. Планки погрешностей указывают на SD.

Чтобы выяснить, может ли HAT также активировать SARS-S в trans , был проведен анализ слияния клетки-клетки, как описано выше, но TTSP экспрессировались в клетках-мишенях, а не в эффекторных клетках. Экспрессия TMPRSS3, TMPRSS6 и гепсина в клетках-мишенях не влияла на слияние клетки с клетками, управляемое SARS-S, в то время как экспрессия TMPRSS2 или TMPRSS4 заметно увеличивала фузогенную активность SARS-S (рис.4Б), что согласуется с нашими опубликованными результатами (14). То же наблюдение было сделано для экспрессии HAT, которая индуцировала эффективное слияние клеток-клеток, вызванное SARS-S, с клетками-мишенями, экспрессирующими эндогенные низкие уровни ACE2 (рис. 4B). Таким образом, HAT активирует спайковый белок SARS как в , цис, , так и в trans , тогда как активация SARS-S с помощью TMPRSS2 происходит только в trans .

Активация расщепления SARS-S с помощью HAT не отменяет необходимости в активности катепсина. PH-зависимая протеаза катепсин L может активировать SARS-S для слияния вируса и клетки (40).Соответственно, слияние вируса с клеткой, вызванное SARS-S, может быть ингибировано лизосомотропным агентом хлоридом аммония (NH 4 Cl) и ингибитором катепсина MDL28170 (40, 42). Поскольку HAT активировал SARS-S для слияния клеток в cis , мы затем исследовали, не зависели ли вирусы, продуцируемые в HAT-экспрессирующих клетках и, таким образом, несущие активированный SARS-S, от активности катепсина для инфицирования клеток-мишеней. Инфекционное проникновение псевдотипов, несущих SARS-S, эффективно ингибировалось как NH 4 Cl, так и MDL28170 в зависимости от концентрации, независимо от экспрессии HAT или TMPRSS2 в вирус-продуцирующих клетках (рис.5 А). Таким образом, расщепление цис SARS-S с помощью TMPRSS2 или HAT не делает вирионы независимыми от активности катепсина для проникновения в инфекционные клетки-хозяева. Напротив, экспрессия TMPRSS2 на клетках-мишенях (расщепление транс ) позволило эффективно инфицировать клетки, обработанные NH 4 Cl или MDL28170, псевдотипами, несущими SARS-S (рис. 5B), в соответствии с нашими предыдущими результатами ( 14). Примечательно, что это наблюдение не подтвердилось для инфицирования HAT-экспрессирующих клеток-мишеней, которые эффективно блокировались обоими агентами (рис.5Б). Эти результаты предполагают, что HAT активирует SARS-S, связанный с клеткой, но не связанный с вирусом, в trans , и подчеркивают, что TMPRSS2 и HAT активируют SARS-S по-разному.

Рис. 5.

Активация SARS-S с помощью HAT не отменяет требования активности катепсина для слияния вируса и клетки. (A) Расщепление цис SARS-S с помощью HAT не спасает управляемое SARS-S проникновение инфекции от блокады ингибиторами катепсина. Лентивирусные псевдотипы, несущие SARS-S, были созданы в клетках 293T, коэкспрессирующих указанные протеазы, или котрансфицированных пустой плазмидой (pcDNA).Псевдотипы использовали для инфицирования клеток 293T, сконструированных для экспрессии высоких уровней ACE2 и предварительно инкубированных с указанными концентрациями ингибитора катепсина B / L MDL28170 или лизосомотропного агента NH 4 Cl. Активность люциферазы в клеточных лизатах определяли через 72 часа после инфицирования. Показаны результаты репрезентативного эксперимента, проведенного в трех экземплярах; планки погрешностей указывают на SD. Сопоставимые результаты были получены в двух независимых экспериментах. (B) Расщепление trans SARS-S с помощью HAT не спасает управляемое SARS-S проникновение инфекции от блокады ингибиторами катепсина.Эксперимент проводили, как описано в легенде к панели А, но протеазы экспрессировались в вирусных клетках-мишенях. Показаны результаты репрезентативного эксперимента, проведенного в трех экземплярах, которые были подтверждены в двух отдельных экспериментах. Планки погрешностей указывают на SD.

ACE2 коэкспрессируется с HAT в ткани легких человека и активирует коронавирус SARS для слияния клеток и клеток. Наконец, мы исследовали, может ли активация SARS-S с помощью HAT модулировать распространение вируса у инфицированных пациентов. Иммуноокрашивание HAT продемонстрировало сильную экспрессию экстра- и внутрилегочных эпителиальных клеток бронхов и альвеолярных макрофагов (рис.6А и данные не показаны). Более слабое положительное иммуноокрашивание предполагало экспрессию на более низком уровне пневмоцитами типа I и типа II (фиг. 6A). Анализ серийного среза легкого продемонстрировал коэкспрессию ACE2 с HAT внутрилегочными эпителиальными клетками бронхов, альвеолярными макрофагами и пневмоцитами II типа, хотя не было обнаружено экспрессии ACE2 пневмоцитами I типа (фиг. 6A). Таким образом, HAT экспрессируется в потенциальных клетках-мишенях SARS-CoV или рядом с ними и может модулировать распространение вируса у инфицированных людей.Действительно, экспрессия HAT и TMPRSS2 способствовала образованию синцитий в клетках 293T, трансфицированных ACE2 и инфицированных SARS-CoV; синцитии отсутствовали в неинфицированных клетках и гораздо реже встречались в инфицированных клетках, трансфицированных пустой плазмидой (фиг. 6B). Точно так же образование синцития было неэффективным в клетках, трансфицированных TMPRSS4 (рис. 6B), что согласуется с нашими предыдущими выводами о том, что TMPRSS4 не активирует SARS-CoV (14). Таким образом, HAT экспрессируется в вирусных клетках-мишенях в легких человека и может способствовать слиянию клеток, инфицированных SARS-CoV, с соседними пермиссивными клетками.

Рис. 6.

HAT и ACE2 коэкспрессируются в легких человека, и HAT активирует коронавирус SARS для слияния клеток. (A, слева) Срез легкого, иммуноокрашенный на HAT с использованием метода пероксидазы (коричневый), демонстрирующий сильную экспрессию внутрилегочных бронхиальных эпителиальных клеток (B) и альвеолярных макрофагов (M). Более слабое положительное иммуноокрашивание предполагало экспрессию на более низком уровне пневмоцитами 1 типа (P1; тонкие плоские клетки) и пневмоцитами 2 типа (P2; более толстые клетки). (A, справа) Серийный срез легких, иммуноокрашенный на ACE2, с использованием метода пероксидазы (коричневый), демонстрирующий экспрессию эпителиальными клетками внутрилегочных бронхов (B), альвеолярными макрофагами (M) и пневмоцитами 2 типа (P2), хотя экспрессия Виден ACE2 пневмоцитами 1 типа.Полоса, 50 мкм (полоса относится к обеим панелям). (B) Экспрессирующие ACE2 клетки 293T трансфицировали экспрессирующими плазмидами HAT, TMPRSS2 или TMPRSS4 или трансфецировали пустой плазмидой (контроль) и инфицировали SARS-CoV (Франкфурт-1; множественность инфекции 0,1). Через 24 часа после инфицирования клетки фиксировали параформальдегидом (8%) и повышали проницаемость, а антиген SARS-CoV выявляли иммуноокрашиванием с использованием человеческой антисыворотки и вторичного антитела козы против Cy3 человека (красный). Параллельно протеазы были обнаружены с помощью мышиных антител против HAT, мышиных антител против TMPRSS2 или мышиных антител против Myc (для TMPRSS4, меченного Myc) и конъюгированных с Cy2 козьих антител против мышиных антител (зеленые).Ядра окрашивали DAPI (синий). Стрелки, частично увеличенные примеры образования синцития (белые квадраты). Прутки, 25 мкм. Аналогичные результаты были получены в независимом эксперименте.

ОБСУЖДЕНИЕ

TMPRSS2 активирует вирус гриппа (4, 7, 8), человеческий метапневмовирус (37) и SARS-CoV (14, 30, 38) в культуре клеток и коэкспрессируется с ACE2 в пневмоцитах типа II, основных SARS- Клетки-мишени CoV (14, 30). Таким образом, вероятно, что эта протеаза модулирует распространение SARS-CoV у инфицированных людей.Родственная протеаза HAT, которая может регулировать структуру и функцию рецептора урокиназы и потенциально других рецепторов (1), также активирует вирусы гриппа (7), но ее потенциальная роль в других вирусных инфекциях не анализировалась. Здесь мы показываем, что HAT, как и TMPRSS2, расщепляет и активирует SARS-S, но способ и результат активации SARS-S этими протеазами заметно различаются.

Во-первых, HAT и TMPRSS2 расщепляют разные мотивы в SARS-S. Мутагенный анализ и масс-спектрометрия показали, что HAT, как и трипсин, расщепляет SARS-S по аргинину 667.Напротив, TMPRSS2 расщепляет SARS-S во множестве, в настоящее время неидентифицированных сайтах, и неизвестно, какое из событий расщепления важно для активации SARS-S. Недавнее исследование предполагает, что активация SARS-S включает два события расщепления, одно на аргинине 667 и одно на аргинине 797 (2), и можно предположить, что последний аминокислотный остаток определяет сайт расщепления, распознаваемый TMPRSS2. Альтернативно, TMPRSS2 может распознавать тот же мотив, что и катепсин L, который, как было показано, расщепляется по R678 (6).Дифференциальное расщепление SARS-S с помощью HAT и TMPRSS2, скорее всего, отражает различную субстратную специфичность, и была определена только субстратная специфичность HAT (49). Альтернативно, последовательности SARS-S, удаленные от сайтов расщепления, могут модулировать распознавание TTSP, возможность, которую еще предстоит изучить.

Во-вторых, HAT активирует клеточный SARS-S в cis и в trans , тогда как TMPRSS2 активен только в trans . Неспособность TMPRSS2 активировать SARS-S в цис может быть объяснена аберрантным расщеплением S-белка или его отсутствием в этих условиях.Наш предыдущий анализ фрагментов расщепления противоречит, но не исключает этих возможностей (14). Более вероятным объяснением может быть то, что активация SARS-S с помощью TMPRSS2 - это пространственно и временно ограниченный процесс, который может продолжаться только после того, как SARS-S установит контакт с ACE2 и TMPRSS2 на целевых клетках. Недавнее открытие, что ACE2 связывается и расщепляется TMPRSS2, подтверждает такой сценарий (38).

В-третьих, экспрессия TMPRSS2, но не HAT, позволяет слияние вируса SARS-S с клетками-мишенями, обработанными ингибитором катепсина.Это наблюдение особенно поразительно, поскольку обработка трипсином связанных с клетками вирионов, несущих SARS-S, позволяет обойтись без активности катепсина для проникновения инфекции (2, 39, 40). Возможное объяснение этого очевидного несоответствия заключается в том, что трипсин последовательно расщепляет SARS-S по аргининам 667 и 797, тогда как расщепление HAT может быть ограничено аргинином 667 и может быть достаточным для активации SARS-S для слияния клетка-клетка, но не для слияния вирус-клетка. . В качестве альтернативы, мы ранее предоставили доказательства необходимости конформационных перестроек (индуцированных при связывании ACE2) внутри SARS-S для протеолиза и проникновения в инфекционные клетки (40).Эти конформационные изменения могут не завершиться за относительно короткое время, в течение которого вирус может вступить в контакт с HAT во время слияния вируса с клеткой, что исключает протеолитическую активацию SARS-S. Напротив, значительные количества S-белка, рецептора и протеазы стабильно доступны на поверхности клетки в течение продолжительных периодов времени во время слияния клетки с клеткой, потенциально позволяя происходить конформационным изменениям и последующему протеолизу.

Несмотря на различия в способе и исходе активации SARS-S с помощью HAT и TMPRSS2, обе протеазы смогли активировать SARS-S для слияния клеток в контексте аутентичного SARS-CoV.Полученные синцитии были легко обнаружены в инфицированных культурах и, как было определено с помощью иммуноокрашивания, были положительными как для SARS-CoV, так и для протеазы, как и ожидалось. Численный анализ показал, что образование синцития в клетках, трансфицированных TMPRSS2 и HAT, происходило примерно в 15 раз чаще, чем в контрольных клетках. Учитывая, что HAT была обнаружена в ACE2-положительных эпителиальных клетках бронхов, что согласуется с отчетом, описывающим экспрессию HAT в бронхах (44), можно предположить, что HAT способствует ранее задокументированному образованию синцития у пациентов, инфицированных SARS-CoV (26). .Аналогичным образом, документально подтвержденные данные о том, что TMPRSS2 экспрессируется на клетках-мишенях SARS-CoV и активирует вирус в культуре клеток, предполагают, что эта протеаза может способствовать распространению вируса среди людей (14, 30). В целом, HAT и TMPRSS2 активируют SARS-S с помощью разных механизмов и могут способствовать распространению вируса среди инфицированных людей.

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим T. F. Schulz, S. Treue и T. Liepold за поддержку.

Хейли Лаванда финансировалась программой Центра биомедицинских исследований NIHR.С.П. и К.Д. были профинансированы BMBF (SARS-Verbund, 01KI1005C). Y.H. был поддержан программой China 973 (2010CB530100). GS был поддержан грантом R01AI074986 от NIAID. CD. финансировался DFG Africa (DR 772 / 3-1) и EMPERIE (код проекта 223498).

СНОСКИ

    • Получено 6 июня 2011 г.
    • Принято 21 сентября 2011 г.
    • Рукопись принята в Интернет 12 октября 2011 г.
  • Авторское право © 2011, Американское общество микробиологии.Все права защищены.

«АэроНабс» обещает мощную ингаляционную защиту от COVID-19

Пока мир ждет вакцин, чтобы взять под контроль пандемию COVID-19, ученые Калифорнийского университета в Сан-Франциско разработали новый подход к остановке распространения SARS-CoV- 2, вирус, вызывающий заболевание.

Под руководством аспиранта UCSF Майкла Шуфа группа исследователей разработала полностью синтетическую, готовую к производству молекулу, которая закрывает важнейший механизм SARS-CoV-2, позволяющий вирусу инфицировать наши клетки.Как сообщается в новой статье, теперь доступной на сервере препринтов bioRxiv, эксперименты с использованием живого вируса показывают, что эта молекула является одним из самых эффективных противовирусных препаратов SARS-CoV-2, которые были обнаружены.

В тестируемом ими аэрозольном составе, который исследователи окрестили «AeroNabs», эти молекулы можно вводить самостоятельно с помощью назального спрея или ингалятора. При использовании один раз в день AeroNabs может обеспечить мощную и надежную защиту от SARS-CoV-2 до тех пор, пока вакцина не станет доступной. Исследовательская группа ведет активные переговоры с коммерческими партнерами о наращивании производства и клинических испытаний AeroNabs.Если эти тесты будут успешными, ученые стремятся сделать AeroNab широко доступным в качестве недорогого лекарства для профилактики и лечения COVID-19.

«Намного более эффективные, чем носимые формы индивидуального защитного снаряжения, мы думаем об AeroNabs как о молекулярной форме СИЗ, которая могла бы служить важным временным промежутком до тех пор, пока вакцины не обеспечат более постоянное решение проблемы COVID-19», - сказал соавтор AeroNabs Питер Уолтер. , Доктор философии, профессор биохимии и биофизики в UCSF и исследователь Медицинского института Говарда Хьюза.По словам Уолтера, для тех, кто не может получить доступ к вакцинам против SARS-CoV-2 или не реагирует на них, AeroNab может стать более надежной линией защиты от COVID-19.

«Мы собрали невероятную группу талантливых биохимиков, клеточных биологов, вирусологов и структурных биологов, чтобы выполнить проект от начала до конца всего за несколько месяцев», - сказал Скуф, сотрудник лаборатории Уолтера и соавтор AeroNabs.

Дизайн в стиле лам

Несмотря на то, что AeroNab были полностью разработаны в лаборатории, они были созданы на основе нанотел, антителоподобных иммунных белков, которые естественным образом встречаются у лам, верблюдов и родственных им животных.С момента их открытия в бельгийской лаборатории в конце 1980-х уникальные свойства нанотел заинтриговали ученых всего мира.

Аашиш Манглик (слева), доктор медицины, доктор философии, и Питер Уолтер, доктор философии

«Хотя они действуют во многом как антитела, обнаруженные в иммунной системе человека, нанотела предлагают ряд уникальных преимуществ для эффективных терапевтических средств против SARS-CoV-2, - объяснил соавтор изобретения Аашиш Манглик, доктор медицинских наук, доцент кафедры фармацевтической химии, который часто использует нанотела в качестве инструмента в своих исследованиях структуры и функции белков, которые отправляют и принимают сигналы через клеточную мембрану.

Например, нанотела на порядок меньше человеческих антител, поэтому ими легче манипулировать и модифицировать в лаборатории. Их небольшой размер и относительно простая структура также делают их значительно более стабильными, чем антитела других млекопитающих. Кроме того, в отличие от человеческих антител, нанотела можно легко и недорого производить массово: ученые вставляют гены, содержащие молекулярные схемы, для создания нанотел в E. coli или дрожжах, и превращают эти микробы в фабрики по производству нанотел с высоким выходом.Тот же метод безопасно использовался на протяжении десятилетий для массового производства инсулина.

Но, как заметил Манглик, «нанотела были для нас только отправной точкой. Хотя они и привлекательны сами по себе, мы думали, что можем улучшить их с помощью белковой инженерии. В конечном итоге это привело к разработке AeroNabs ».

Спайк - ключ к инфекции

SARS-CoV-2 использует так называемые белки-шипы для заражения клеток. Эти шипы покрывают поверхность вируса и придают вид короны при просмотре в электронный микроскоп - отсюда и название вирусного семейства, которое включает SARS-CoV-2, «коронавирус».Однако шипы - это больше, чем просто украшение - они являются важным ключом, который позволяет вирусу проникать в наши клетки.

Подобно выдвижному инструменту, шипы могут переключаться из закрытого неактивного состояния в открытое активное состояние. Когда любой из примерно 25 спайков вирусной частицы становится активным, три «рецептор-связывающих домена», или RBD, этого спайка становятся доступными и приготавливаются для присоединения к ACE2 (произносится как «ace two»), рецептору, обнаруженному в клетках человека, легкие и дыхательные пути.

SARS-CoV-2 является частью семейства коронавирусов, названного в честь шипов, которые покрывают поверхность вируса и придают вид короны при просмотре в электронный микроскоп. Изображение предоставлено NIH

Исследователи из

UCSF полагали, что если им удастся найти нанотела, препятствующие взаимодействиям spike-ACE2, они смогут предотвратить заражение вирусом клеток. Фото Ноя Бергера

Благодаря взаимодействию типа «замок-и-ключ» между рецептором ACE2 и шиповым RBD вирус проникает в клетку, где затем превращает своего нового хозяина в производителя коронавируса. Исследователи полагали, что если им удастся найти нанотела, которые препятствуют взаимодействиям спайк-ACE2, они смогут предотвратить заражение вирусом клеток.

Нанотела отключают шипы и предотвращают заражение

Чтобы найти эффективных кандидатов, ученые проанализировали библиотеку из более чем 2 миллиардов синтетических нанотел, совместно разработанных в лабораториях Манглика и доктора философии Эндрю Крузе из Гарвардской медицинской школы. После последовательных раундов тестирования, в ходе которых они вводили все более строгие критерии для исключения слабых или неэффективных кандидатов, ученые получили 21 нанотело, которые не позволяли модифицированной форме шипа взаимодействовать с ACE2.

Аспирант UCSF Брайан Фауст изучает трехмерное изображение спайковой частицы COVID-19, созданное с помощью криоэлектронного микроскопа. Фото Ноа Бергера

Дальнейшие эксперименты, в том числе использование криоэлектронной микроскопии для визуализации интерфейса нанотело-шип, показали, что наиболее мощные нанотела блокируют взаимодействия шип-ACE2, прочно прикрепляясь непосредственно к RBD-шипу. Эти нанотела действуют как оболочка, которая закрывает «ключ» RBD и предотвращает его вставку в «замок» ACE2.”

С этими результатами исследователям все еще нужно было продемонстрировать, что эти нанотела могут предотвратить заражение клеток настоящим вирусом. Вероника Резель, доктор философии, вирусолог из лаборатории Марко Виннуцци, доктора философии в Институте Пастера в Париже, проверила три самых многообещающих нанотела против живого SARS-CoV-2 и обнаружила, что нанотела обладают необычайно мощным действием, предотвращая заражение даже при крайне тяжелых условиях. низкие дозы.

Наиболее мощные из этих нанотел, однако, действуют не только как оболочка над RBD, но и как молекулярная мышеловка, зажимая иглу в закрытом, неактивном состоянии, что добавляет дополнительный уровень защиты от спайка - ACE2 взаимодействия, которые приводят к заражению.

От нанотел к AeroNab

Затем ученые разработали это нанотело двойного действия несколькими способами, чтобы превратить его в еще более мощное противовирусное средство. В одной серии экспериментов они мутировали каждый из аминокислотных строительных блоков нанотела, который контактирует с шипом, чтобы обнаружить два специфических изменения, которые привели к 500-кратному увеличению эффективности.

Из-за присущей нанотелам стабильности, не было потери противовирусной активности в аэрозольной форме, что позволяет предположить, что AeroNab являются мощным противовирусным препаратом SARS-CoV-2, который может быть практичным для введения через ингалятор длительного хранения или назальный спрей. Фото Ноя Бергера

В отдельной серии экспериментов они сконструировали молекулярную цепочку, которая могла бы связать три нанотела вместе. Как уже отмечалось, каждый спайковый белок имеет три RBD, любой из которых может присоединяться к ACE2, чтобы обеспечить проникновение вируса в клетку. Связанное тройное нанотело, разработанное исследователями, гарантировало, что если одно нанотело присоединится к RBD, два других присоединятся к оставшимся RBD. Они обнаружили, что это тройное нанотело в 200000 раз мощнее, чем одно только нанотело.

И когда они воспользовались результатами обеих модификаций, соединив вместе три мощных мутировавших нанотела, результаты оказались «зашкаливающими», - сказал Уолтер. «Он был настолько эффективным, что превосходил наши возможности измерить его эффективность».

Легко вводить в виде аэрозоля

Эта сверхмощная конструкция из трех частей нанотела легла в основу AeroNabs.

В последнем наборе экспериментов исследователи подвергли трехкомпонентные нанотела серию стресс-тестов, подвергли их воздействию высоких температур, превратили их в порошок длительного хранения и создали аэрозоль.Каждый из этих процессов сильно повреждает большинство белков, но ученые подтвердили, что, благодаря присущей нанотелам стабильности, не было потери противовирусной активности в аэрозольной форме, что позволяет предположить, что AeroNabs являются мощным противовирусным препаратом SARS-CoV-2, который может быть практичным для введения через ингалятор длительного хранения или назальный спрей.

«Не только мы думаем, что AeroNab - это замечательная технология», - сказал Манглик. «Наша команда ведет постоянные обсуждения с потенциальными коммерческими партнерами, которые заинтересованы в производстве и распространении AeroNabs, и мы надеемся вскоре начать испытания на людях.Если AeroNab окажутся столь же эффективными, как мы ожидаем, они могут помочь изменить ход пандемии во всем мире ».

Авторы: Дополнительные авторы: Брайан Фауст, Рубен А. Сондерс, Смрити Сангван, Ник Хоппе, Морган Бун, Кристиан Бач Биллесбёлле, Марселл Зимани, Ишан Дешпанде, Цзяхао Лян, Адитья А. Ананд, Нив Добзински, Баэт Бенджамин Барси-Райн, Владислав Белый, Силке Нок и Ювэй Лю из UCSF; Камилла Р. Симоно, Кристоффер Леон, Неван Дж. Кроган, Даниэль Л.Свани и Мелани Отт из Института количественных биологических наук UCSF (QBI) и Института Дж. Дэвида Гладстона; Эндрю В. Бэрил-Хилл из Cytiva Life Sciences; Саян Гупта и Кори Й. Ральстон из Национальной лаборатории Лоуренса в Беркли; Крис М. Уайт и Адольфо Гарсия-Састре из Медицинской школы Икана на горе Синай; и Консорциум структурной биологии QBI Coronavirus Research Group. Шуф, Фауст, Сондерс, Сангван и Резель - соавторы рукописи.

Финансирование: Эта работа была поддержана Фондом реагирования на COVID-19 UCSF, грантом Allen & Company и сторонниками программы UCSF для прорывных биомедицинских исследований (PBBR), созданной при поддержке Фонда Сэндлера.Другая поддержка включала гранты Национального института здравоохранения (NIH) DP5OD023048, S10OD020054, S10OD021741, 1R01GM126218; Грант Лаборатории совершенствования ANR-10-LABX-62-IBEID; кампания по сбору средств URGENCE COVID-19 Institut Pasteur; Управление науки и Управление биологических и экологических исследований Министерства энергетики США по контракту DE-AC02-05Ch21231; докторская стипендия Хелен Хэй Уитни; Фонд Альфреда Бензона; подарок от Фонда Родденберри; Медицинский институт Говарда Хьюза; Благотворительные фонды Пью; Эстер А.И Фонд Джозефа Клингенштейна; и Программа стипендиатов Сирла.

Раскрытия: Шуф, Фауст, Сондерс, Хоппе, Уолтер и Манглик являются изобретателями предварительного патента, описывающего нанотела против Спайка, описанные в рукописи.

Калифорнийский университет в Сан-Франциско (UCSF) специализируется исключительно на науках о здоровье и занимается продвижением здоровья во всем мире посредством передовых биомедицинских исследований, получения высшего образования в области наук о жизни и медицинских профессий, а также передового опыта в уходе за пациентами.UCSF Health, который служит основным академическим медицинским центром UCSF, включает высококлассные специализированные больницы и другие клинические программы, а также имеет филиалы по всей территории залива.

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *